下丘腦視前正中核腺苷和5-羥色胺對大鼠睡眠-覺醒周期的影響.pdf

1、目的：
　　腺苷(adenosine,AD)和5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)是目前已知的睡眠-覺醒周期調節(jié)的神經體液因子,下丘腦視前正中核(median preoptic nucleus,MnPN)是下丘腦視前區(qū)重要的睡眠調節(jié)腦區(qū)。本研究采用腦立體定位、核團插管、微透析、微量注射、多導睡眠描計等方法研究MnPN區(qū)AD和5-HT對大鼠睡眠-覺醒周期的影響。
　　方法：
　　1.模型建立雄性

2、成年SD大鼠,清潔級,體重280-320g。戊巴比妥鈉(40mg/kg)經腹腔注射麻醉后,安裝腦電和肌電電極用于多導睡眠描計,將微透析或微量注射用引導管插入大鼠MnPN區(qū)(AP:+0.24mm、L/R:0.0mm、H:7.8mm)供核團內給藥使用。插管與記錄電極均以牙科水泥固定于顱骨上,并將引導腦電和肌電的電極通過導線連接到微型插座上。大鼠術后置于隔音室中恢復一周,記錄前一天連接EEG/EMG導線,以予適應記錄狀態(tài)。
　　2.動物

3、分組動物隨機分為四組:人工腦脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)組,AD組,硝基苯硫嘌呤核苷[S-(4-nitrobenzyl)-6-thioinosine,NBTI]組,5-HTP(5-hydroxytryptophan)組。
　　3.微透析灌注給藥術后1周,將微透析探針置入引導管內,放置探針1天后開始灌注給藥。給藥前2h預灌注人工腦脊液,給藥時間為21:00～23:00。ACSF組預灌

4、注ACSF,AD組預灌注300μmol/L的AD,NBTI組預灌注20μmol/L的NBTI,灌流速度為2μl/min。
　　4.藥物微量注射通過引導管向MnPN內注射5-HTP(5-HTP組)或ACSF(對照組),1min內注射完畢,留針1min以防藥液溢出。實驗正式開始前偽注射(僅模擬注射操作)兩天。給藥時間為08:50-09:00。
　　5.多導睡眠描計及數(shù)據分析每次描記均從07∶00開始,連續(xù)記錄24h。以10s為一

5、分段時間,將睡眠—覺醒周期分為3期:(1)覺醒期(W):以低幅快波腦電和明顯的肌電活動為特征;(2)非快速眼動睡眠期(NREM):以睡眠梭形波和高幅δ波為特征,肌電活動明顯減少;(3)快速眼動睡眠期(REM):以低幅快波為特征,除偶爾有肌肉抽動外,無明顯肌電活動?？偹邥r間(TST)為NREM和REM之和。
　　6.組織學鑒定實驗結束后,通過引導管向MnPN區(qū)插入單極不銹鋼電極。通過電極向微透析或微量注射位點通以2.5mA直流電1

6、0s,行陽極毀損,判斷探針軌跡底部是否位于MnPN區(qū),僅對定位準確的大鼠實驗數(shù)據進行統(tǒng)計。
　　7.統(tǒng)計學分析采用SPSS12.0軟件進行統(tǒng)計分析,數(shù)據以x±S表示,兩樣本比較采用t檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1.MnPN區(qū)微透析灌注AD和NBTI能明顯增加大鼠NREM睡眠時間,減少覺醒時間。
　　2.灌注AD后睡眠時間在第二、三小時增加,灌注NBTI之后睡眠時間在第三、四小時增加。<