雞繁殖性狀相關基因及卵巢組織差異表達基因研究.pdf

1、家禽的繁殖性狀，包括開產日齡、產蛋數、蛋重等是現代家禽生產中重要的經濟性狀。研究家禽繁殖性狀相關的基因對于揭示影響家禽產蛋性能的的遺傳機制和優(yōu)質高產蛋雞的選育有重要的意義。候選基因法是一種定位數量性狀基因的主要方法，這種方法是依據生物體內已知的或可能的生理生化過程來選擇相關基因并對其與表型的關系進行探討。利用候選基因鑒定法定位主效基因在畜禽中已有許多成功的范例，如雞性連鎖矮小基因，豬應激綜合癥基因等。差異顯示RT-PCR是研究基因差異表

2、達的重要方法。 本研究通過候選基因法分析了繁殖性狀相關基因FSHR、．BMPR- IB多態(tài)性與魯禽雞群產蛋性能的關系，分析了FSHR、BAIPR-IB和IGFBP-4 mRNA在濟寧百日雞和羅曼褐卵巢和卵泡中的發(fā)育性變化；采用差異顯示RT-PCR技術篩選并克隆了卵巢組織差異表達的幾個基因。 試驗一：克隆了濟寧百日雞、文昌雞、仙居雞、海藍褐、藏雞FSHR 5’調控區(qū)約1.8 kb的序列，GenBank登錄號DQ303232

3、～DQ3032327，檢出核苷酸變異48處。其中39處單核苷酸置換，1處三核苷酸置換和8處插入/刪除突變。-1046變異包含了A、G、T三個核苷酸，其余24個為轉換突變，14個屬于顛換突變。在-868位點存在一段200bp的插入序列，突變率極低，僅0.0698(魯禽群體)。對魯禽群體，PCR檢測了．868位點的多態(tài)性分布；變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測了-71“TG”插入/刪除突變；通過PCR-RFLP方法檢測了-237T→A的突變。關聯分

4、析的結果表明，上述三個位點的多態(tài)性對魯禽肉雞33周(E33)和42周(E42)的產蛋數效應不顯著。通過三位點的Hardy-Weinberg檢驗，證明群體處于平衡狀態(tài)。比對-868插入序列發(fā)現其中有24 bp與人的SMARCALl基因(SWI/SNF related，matrix associated，actin dependent regulator ofchromatin，a-likel)同源，可能與染色質的狀態(tài)調節(jié)有關。 試

5、驗二：克隆了濟寧百日雞、文昌雞、仙居雞、海藍褐、藏雞BMPR-IB外顯子6～7序列，GenBank登錄號NW_000203。檢出11處單核苷酸變異，其中9個轉換，2個顛換。PCR-SSCP和RFLP方法分別檢測了魯禽群體35C-T和287G→A兩處突變。與產蛋性能E33和E42關聯分析結果表明，這2個位點的效應亦不顯著。Hardy-Weinberg檢驗35位點群體處于平衡狀態(tài)，而287位點群體處在不平衡狀態(tài)。 試驗三：通過半定量

6、RT-PCR分析了繁殖性狀相關基因FSHR、BMPR-lB和IGFBP-4 mRNA在濟寧百日雞和羅曼褐卵巢和卵泡中的發(fā)育性變化。兩品種兩期卵巢、卵泡中FSHR mRNA的表達差異極顯著；濟寧百日雞黃卵泡和F5卵泡中FSHR mRNA的表達差異顯著高于F3卵泡，與卵巢的表達水平差異極顯著。羅曼褐黃卵泡中FSHRmRNA的表達差異顯著高于F5卵泡和F3卵泡，與卵巢的表達水平差異極顯著。濟寧百日雞與羅曼褐相比，在15周卵巢和黃卵泡中BMPR

7、- IB mRNA表達水平差異極顯著。濟寧百日雞卵泡中IGFBP-4 mRNA表達顯著低于卵巢；而羅曼褐IGFBP-4 mRNA的表達變化不顯著。兩品種各級卵泡間變化不顯著。 試驗四：通過差異顯示RT-PCR得到雞卵巢組織差異表達基因7個。TPD52L2在濟寧百目雞和羅曼褐20周齡(產蛋早期)較15周(未開產)卵巢中mRNA表達水平顯著上調；DNAJC8mRNA表達水平在濟寧百日雞和羅曼褐20周齡較15周卵巢中下調，差異極顯著；

8、LDHB mRNA表達水平在羅曼褐15周齡到20周齡表達下調，而在濟寧百日雞無顯著變化；其它TNRC6A表達上調，LOC771135、ChEST756m4、LOC772269表達下調，差異均達到顯著水平。 家禽的性成熟由一系列基因形成的基因網絡調控。本研究通過對．FSHR、BMPR-IB和IGFBP-4的序列分析、多態(tài)性檢測和表達分析，探討了它們與雞產蛋性能的關系；通過對卵巢組織在性成熟過程中基因表達的變化，找到了7個差異表達的