雞貯精腺差異表達(dá)基因的研究.pdf

1、禽類品種間和個體間的性狀差異本質(zhì)上都是由于基因種類的差異和基因表達(dá)量的差異所致。對同一個體不同組織或不同個體相同組織的基因表達(dá)差異進(jìn)行比較研究，可獲得與生命過程相關(guān)的信息，揭示不同性狀的發(fā)生發(fā)展機(jī)理。 禽類輸卵管的子宮陰道交接部存在一種特殊的管狀腺，該腺體由單層柱狀上皮細(xì)胞構(gòu)成，腺管細(xì)胞頂部無纖毛，細(xì)胞核排列整齊，位于細(xì)胞的基部，因精子在此貯存而被稱為貯精腺。貯精腺的存在使禽類精子在輸卵管內(nèi)可以長期存活，并能長時間保持受精能力。

2、自貯精腺被發(fā)現(xiàn)以來，人們從貯精腺的組織學(xué)和生殖生理學(xué)等方面進(jìn)行了廣泛的研究，但這些研究還不足以解釋貯精腺的貯精機(jī)理。 本實(shí)驗(yàn)利用mRNA差異顯示技術(shù)，以29bp的10條錨定引物和25bp的10條隨機(jī)引物進(jìn)行DDRT-PCR分析不同處理及不同持續(xù)受精能力的母雞的貯精腺組織。通過對100個引物組合的篩選后發(fā)現(xiàn)有63 對引物組合的擴(kuò)增效果較好，其中有差異條帶的引物組合有23對，共獲得差異條帶30條，二次擴(kuò)增重復(fù)出現(xiàn)的差異條帶有13條，

3、通過克隆、測序及序列分析，獲得6個ESTs序列。 對獲得的6個ESTs序列進(jìn)行基因信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)：SST01部分序列與雞第2號染色體上的Neurexophilin基因的一部分相似，其同源性達(dá)97.8％，推測SST01與貯精腺生理功能的神經(jīng)調(diào)控有關(guān)；SST02部分序列與雞第3號染色體上的絲裂素活化蛋白激酶基因的一部分相似，其同源性達(dá)98.7％，推測SST02與貯精腺上皮細(xì)胞的增殖、分化有關(guān)；SST03部分序列與雞第8號染色體上磷脂

4、酰肌醇蛋白聚糖基因的一部分相似，其同源性達(dá)98.5％，推測SST03與細(xì)胞的生長分化有關(guān)；其他3個ESTs序列與雞己有核酸數(shù)據(jù)庫中的eDNA克隆或EST具有較高相似性，可認(rèn)為是雞的新EST序列，但其功能未知。 利用半定量RT-PCR檢測SST01、SST04和SST05的EST序列的，發(fā)現(xiàn)這些ESTs表達(dá)的上調(diào)與貯精腺貯精能力增強(qiáng)有關(guān)，但這些ESTs的全序列信息及其功能以及作用方式還不清楚，這些都有待今后進(jìn)一步的研究。通過本實(shí)驗(yàn)