雞Apela基因的鑒定及表達(dá)調(diào)控研究.pdf

1、Apelin是具有多種生物學(xué)功能的脂肪因子，其作為天然配體，能作用于oGPCRs APJ受體并激活下游通路進(jìn)而調(diào)節(jié)脂肪代謝。近期研究發(fā)現(xiàn)，Apela同樣可以激活A(yù)PJ受體，發(fā)揮著與Apelin相似的功能，被認(rèn)為可能是一個(gè)新的脂肪因子。本研究通過前期高通量測序數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)蛋高峰期母雞肝臟中的Apela基因表達(dá)量較青年母雞顯著上升，但其是否影響雞體內(nèi)脂代謝并不清楚。為研究Apela基因的表達(dá)特性以及調(diào)控機(jī)理，同時(shí)揭示其與脂代謝的關(guān)系，本試驗(yàn)

2、首先對(duì)雞Apela基因克隆并進(jìn)行生物信息學(xué)分析，然后利用熒光定量PCR技術(shù)分析雞Apela基因的時(shí)空表達(dá)特性，最后采用雌激素及雌激素受體拮抗劑處理的母雞和雞胚原代細(xì)胞模型來探究雞Apela基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制。結(jié)果如下:
　　1.熒光定量PCR驗(yàn)證結(jié)果表明，雞Apela基因在產(chǎn)蛋高峰期母雞腫臟中的表達(dá)量較青年母雞顯著升高(P＜0.05)，與高通量數(shù)據(jù)結(jié)果一致。
　　2.根據(jù)NCBI雞基因組中的Apela基因預(yù)測序列，克隆出雞Ap

3、ela基因的編碼區(qū)序列。雞Apela氨基酸序列比對(duì)分析表明，其與人和鼠的同源性較高，同時(shí)與人和鼠Apelin C端的13個(gè)氨基酸序列相似度很高;SMRAT軟件分析結(jié)果顯示，雞Apela擁有LCR蛋白結(jié)構(gòu)域，可能是其與受體結(jié)合的活性單元;經(jīng)過對(duì)雞Apela及Apelin基囚的進(jìn)化分析后發(fā)現(xiàn)，雞Apela基囚與Apelin基因來源于同一祖先，Apela基因極可能是由Apelin基因分化而來。
　　3.雞Apela基因表達(dá)特性研究表明，

4、Apela基因在10周齡和30周齡母雞肝臟、腎臟、胰腺中較高表達(dá)，在肺和腺胃中少量表達(dá)，而在心臟、脾臟、十二指腸、腹脂、卵巢、胸肌中幾乎無表達(dá)。Apela基因在后備期（1日齡、1周齡、10周齡、15周齡、20周齡）母雞肝臟中的表達(dá)量較低，而在產(chǎn)蛋高峰期（30周齡和35周齡）母雞肝臟中表達(dá)量顯著上調(diào)。結(jié)果表明雞Apela基因很可能參與雞肝臟脂肪合成代謝。
　　4.用不同濃度的17β-雌二醇對(duì)10周齡青年母雞和雞胚肝臟原代細(xì)胞處理后，

5、母雞血清脂類指標(biāo)(TG、TC、VLDL-c)顯著升高，同時(shí)母雞及雞胚肝臟原代細(xì)胞中APOB和APOVLDLⅡ基因表達(dá)量較對(duì)照組顯著升高（P＜0.05），表明雌激素發(fā)揮生理作用，脂代謝旺盛。在雌激素處理體內(nèi)體外模型中，雞Apela基因在雌激素處理后的母雞肝臟中表達(dá)量顯著升高(P＜0.05)，同樣在雌激素處理后的雞胚肝臟原代細(xì)胞中表達(dá)量也顯著升高（P＜005），表明雞Apela基因受到雌激素的調(diào)控。結(jié)果預(yù)示雞Apela參與雞肝臟脂代謝過程。

6、
　　5.使用雌激素及其受體拮抗劑MPP（ER-α的高度選擇性拮抗劑）、ICI182780和tamoxifen（ERα和ERβ受體的拮抗劑，tamoxifen有興奮GPR30的作用）處理雞胚腫臟原代細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，雌激素處理后Apela基因表達(dá)顯著上調(diào)(P＜005)，而分別加入MPP、ICI182，780和tamoxifen與雌激素共處理后，Apela基因表達(dá)水平較僅雌激素處理組顯著下調(diào)（P＜0.05），而與空白對(duì)照組無顯著差異(P＞