調(diào)控黃山黑雞肌肉中多不飽和脂肪比率的關(guān)鍵基因鑒定及功能驗(yàn)證.pdf

1、脂肪酸的含量、比例及種類對改善雞肉品質(zhì)及風(fēng)味起著重要作用。明確脂肪酸在家禽體內(nèi)代謝的規(guī)律和分子調(diào)控機(jī)制能夠?yàn)楦纳齐u肉品質(zhì)提供新的依據(jù)。本試驗(yàn)以3只具有極端高多不飽和脂肪酸比率和3只極端低多不飽和脂肪酸比率黃山黑雞腿肌組織為試驗(yàn)材料，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序分析以找出差異基因。整合差異表達(dá)基因、已報(bào)道的影響雞肉脂肪酸代謝的數(shù)量性狀基因座(Quantitative trait loci，QTL)及基因的生物學(xué)功能分析，得到10個(gè)影響肌肉中多不飽和脂肪

2、酸含量的候選基因。其中，將脂肪酸脫氫酶2(Fatty acid desaturase2，F(xiàn)ADS2)基因作為后續(xù)的關(guān)鍵候選基因進(jìn)行驗(yàn)證。通過構(gòu)建FADS2基因的RNA干擾慢病毒表達(dá)載體，并在分離的雞原代前脂肪細(xì)胞上鑒定其沉默效率，篩選出有效干擾序列，同時(shí)利用RNA干擾技術(shù)探討了FADS2基因?qū)?9個(gè)脂肪酸代謝關(guān)鍵功能基因表達(dá)的影響及調(diào)控脂肪酸代謝機(jī)理。主要結(jié)果如下
　　(1)脂肪酸含量檢測:通過對20個(gè)樣品的脂肪酸組成進(jìn)行檢測，挑

3、選出3只具有極端高多不飽和脂肪酸比率(0.324、0.329、0.324)和3只極端低多不飽和脂肪酸比率(0.285、0.261、0.265)黃山黑雞腿肌組織為試驗(yàn)材料(P＜0.01)。
　　(2)轉(zhuǎn)錄組測序篩選關(guān)鍵基因:通過轉(zhuǎn)錄組測序，本研究發(fā)現(xiàn)了274個(gè)差異表達(dá)的基因。GO和KEGG分析表明，差異表達(dá)基因富集的生物過程主要參與不飽和脂肪酸的合成、脂肪酸代謝和細(xì)胞連接等相關(guān)的途徑。綜合分析差異表達(dá)基因與以往報(bào)道的QTL表明FAD

4、S2，DCN,FRZB，OGN,PRKAG3，LHFP,CHCHD10,CYTL1，F(xiàn)BLN5和ADGRD1是影響黃山黑雞肌肉中多不飽和脂肪酸比率的關(guān)鍵基因。
　　(3)關(guān)鍵基因的功能驗(yàn)證:試驗(yàn)以雞FADS2基因mRNA序列作為干擾靶點(diǎn)，設(shè)計(jì)3組靶向FADS2的小干擾RNA(siRNA)。FADS2-siRNA慢病毒重組質(zhì)粒侵染雞前脂肪細(xì)胞篩選出FADS2-siRNA F1組沉默效果達(dá)60％。構(gòu)建FADS2基因穩(wěn)定下調(diào)的雞前脂肪細(xì)

5、胞模型。FADS2基因被沉默后，ELOVL5,FADS1，ACACA，ACSL1，LPL，PPARG,LPIN1，ADFP,XDH,PLIN2，ACOX1等脂肪酸代謝相關(guān)基因的上調(diào)量分別為14.91％,24.59％,54.56％,29.59％,39.57％,11.55％,45.94％,67.56％,195.49％,67.55％,31.62％;ELOVL6,ACLY,CD36,ACSS2,SREBF1,INSIG1,GPAM,PNPLA2