13452.stat5b介導生長激素調(diào)控雞igfi基因表達的研究

1、碩士學位論文論文題目STAT5b介導生長激素調(diào)控雞IGFI基因表達的研究研究生姓名王慧娟指導教師姓名顧志良專業(yè)名稱遺傳學研究方向動物分子遺傳學論文提交日期2013年4月STAT5b介導生長激素調(diào)控雞IGFI基因表達的研究中文摘要I中文摘要生長軸是動物體內(nèi)從下丘腦垂體靶器官的一系列激素及其受體所組成的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)。生長激素(GH)通過IGFI介導調(diào)節(jié)動物生長和細胞分化，通過提高生長軸中GH和IGFI水平，促進增重、提高飼料轉(zhuǎn)化率和改善肉

2、品質(zhì)，是畜禽生長調(diào)控的一種新途徑。GH可以通過STAT5b的介導促進哺乳動物IGFI基因的表達，本研究首先通過實時熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)GH可以促進雞原代肝細胞IGFI基因表達的上調(diào)，然后通過生物信息學、分子克隆技術(shù)、體外細胞共轉(zhuǎn)染實驗、雙熒光素酶報告基因檢測實驗和ChIP技術(shù)等研究了雞IGFI基因及其上下游側(cè)翼序列上起增強子作用的STAT5b結(jié)合位點，試圖弄清GH調(diào)控雞的IGFI基因表達的分子機理。主要研究結(jié)果如下：(1)為了研究雞肝臟中

3、表達的IGFI基因在離體條件下受GH調(diào)控的mRNA表達情況，以3～4周齡雌性商品代AA肉雞為實驗材料，采用改良的半原位兩步灌流法并結(jié)合消化法分離肝細胞，進行原代培養(yǎng)；采用熒光定量PCR的方法，檢測GH處理12h后IGFImRNA表達情況。結(jié)果表明：膠原酶消化法所獲得的肝細胞分離良好，形態(tài)完整，鋪板4h即貼壁，繼續(xù)培養(yǎng)24h即可用于GH處理實驗；GH能夠引起雞肝細胞中IGFImRNA表達的上調(diào)。(2)為了弄清楚GH促進雞IGFImRNA表

4、達上調(diào)是否通過STAT5b介導，首先利用生物信息學和VISTA程序?qū)﹄uIGFI基因(NW_001471513)及其上下游側(cè)翼端的STAT5b結(jié)合位點進行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在雞IGFI基因約50kb和其5側(cè)翼序列約40kb以及其3側(cè)翼序列約10kb共約100kb序列上共含有57個STAT5b結(jié)合位點，按其順序被命名為S1～n；TTCNNNGAA是人、小鼠、大鼠等物種保守的STAT5b結(jié)合位點的共有序列；與小鼠等其他哺乳動物相比，并沒有保守的