豬MIF基因克隆及表達(dá)調(diào)控研究.pdf

1、巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(macrophagemigrationinhibitoryfactor，MIF)是發(fā)現(xiàn)能抑制巨噬細(xì)胞隨機(jī)遷移的關(guān)鍵細(xì)胞因子，在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。本文通過(guò)同源序列法，設(shè)計(jì)擴(kuò)增基因的特異性引物，利用RT-PCR技術(shù)克隆了梅山豬MIF基因全編碼序列及基因組序列：用輻射雜種細(xì)胞學(xué)技術(shù)(RH)對(duì)基因進(jìn)行染色體定位：采用生物信息學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)分析其核苷酸和氨基酸序列；用實(shí)時(shí)定量PCR方法分析MIF基因的組織表達(dá)譜；構(gòu)

2、建基因的真核表達(dá)載體并實(shí)現(xiàn)了離體細(xì)胞超表達(dá)。根據(jù)HTGS數(shù)據(jù)庫(kù)信息，克隆到豬MIF基因5’側(cè)翼長(zhǎng)2000bp的啟動(dòng)子序列，并用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)豬MIF啟動(dòng)子活性。通過(guò)不同濃度的羅格列酮(10-5×10-5，10-6mol/L)刺激或?qū)cDNA-PPARγ2載體轉(zhuǎn)染NIH3T3成纖維細(xì)胞，分析PPARγ2對(duì)MIF基因表達(dá)調(diào)控的影響。結(jié)果表明：(1)克隆得到梅山豬MIF基因全長(zhǎng)編碼區(qū)348bp，編碼115個(gè)氨基酸，克隆到兩個(gè)內(nèi)含