豬Angptl家族基因的克隆、表達及調控研究.pdf

1、血管生成素相關蛋白是最新發(fā)現(xiàn)的一族不僅與血管生成有關，而且與脂類代謝、葡萄糖代謝和胰島素敏感性密切相關的分泌性蛋白質因子。它們屬于纖維蛋白原超家族，具有同血管生成素相似的結構特征，即N端的信號肽序列，介導同源寡聚體形成的螺旋樣結構域和調節(jié)配體活性的纖維蛋白原樣結構域。但是，血管生成素樣蛋白不能與 Tie2 受體結合，所以他們不是真正意義上的血管生成素，故命名為血管生成素相關蛋白(ARP)/血管生成素樣蛋白(Angptl)。 本文

2、以梅山豬為材料克隆了豬 Angptl家族的5個基因，并利用輻射雜種細胞板技術和半定量 RT-PCR等方法進行了染色體定位和組織表達分析；同時研究了它們在脂肪型豬(通城豬)和瘦肉型豬(長白豬)組織中的表達差異；最后以HepG2細胞為研究對象，進行了表達調控的初步研究，得到如下結果： 1、利用RT-PCR、5’RACE和3’RACE方法，擴增并拼接得到 Angptls全編碼區(qū)的cDNA序列，其中 Angptl1編碼區(qū)為1476bp，

3、編碼491個氨基酸；Angptl2 編碼區(qū)為1482bp，編碼493個氨基酸；Angptl3編碼區(qū)為1389bp，編碼462個氨基酸；Angpd4編碼區(qū)為1239bp，編碼412個氨基酸；Angptl6編碼區(qū)為1362bp(非全編碼區(qū)，缺5’端約30個堿基)，編碼453個氨基酸。 2、根據(jù)已擴增的豬 Angptls的cDNA序列和人 Angptls的基因序列及mRNA 序列，分別設計引物擴增 Angptls 內含子的基因片斷。再

4、根據(jù)所測內含子序列設計引物，利用輻射雜種板技術對這5個基因進行染色體定位，結果表明它們分別定位在4條染色體上，其中 Angptl4和 Angptl6定位于2號染色體的同一區(qū)域。上述5個基因的定位結果皆與人基因組中相應基因的染色體位置相對應。 3、以梅山豬的脂肪組織、骨骼肌、心、胃、肝、肺、脾、腸、腦、腎十個組織樣品為材料，用半定量RT-PCR的方法研究了 Angptls的組織表達譜。結果表明Angptl1、Angptl2和 An

5、gptl4是廣譜表達，其中 Angptl1 在脂肪組織、胃和脾中表達量最高，Angptl2在脂肪組織和腸中高效表達，Angptl4在脂肪組織中表達最豐富。而Angptl3和 Angptl6主要在肝臟中表達，另外，Angptl6在脂肪組織、胃、腸和腦組織中也有微量表達。 4、以脂肪型豬(通城豬)和瘦肉型豬(長白豬)的組織樣品為材料，對 Angptls在兩種不同類型豬中的組織表達差異進行了研究。結果顯示 Angptl1 和 Angp

6、tl2 基因在通城豬肝臟和心臟中的表達量高于長白豬的相應組織，而在通城豬脂肪組織中的表達量卻低于長白豬脂肪組織；Angptl3 在通城豬肝臟中的表達量高于長白豬；Angptl4基因在通城豬肝臟和脂肪組織中的表達量均高于長白豬的相應組織：Angptl6基因在通城豬肝臟的表達量低于長白豬。 5、以人肝瘤細胞系HepG2為材料，研究葡萄糖、胰島素、克倫特羅和地塞米松對 Angptls的調控作用。結果表明，高濃度葡萄糖(25mmol/L

7、、50 mmol/L 和100mmol/L) 處理顯著升高 Angptl4 mRNA的表達，降低 Angptl6 mRNA的表達量。胰島素處理顯著抑制Angptl3、Angptl4、Angptl6的表達量。當用相同濃度胰島素(100nmol/L) 和不同濃度葡萄糖處理時，Angptls 表達量的變化趨勢與不同濃度葡萄糖處理的變化趨勢相似?？藗愄亓_處理增加 Angptl3和ChREBP mRNA的表達。地塞米松處理顯著增加 Angptl4