豬Arf家族基因的克隆、定位及組織表達(dá)譜分析.pdf

1、ADP核糖基化因子（Arf），是一類GTP結(jié)合蛋白。它涉及多種基礎(chǔ)的細(xì)胞生物學(xué)過程，包括細(xì)胞的分泌作用，胞吞，吞噬，胞質(zhì)分裂，細(xì)胞粘附以及腫瘤細(xì)胞的侵入等多種作用。
　　 本文通過RT-PCR方法克隆了梅山豬Arf家族六個(gè)基因的全編碼區(qū)序列。采用豬輻射雜種細(xì)胞學(xué)技術(shù)（RH）對此家族基因進(jìn)行了染色體定位。此外，運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR方法我們分析了此家族基因在梅山四月齡豬各個(gè)組織的表達(dá)情況，研究結(jié)果如下：
　　 1．?dāng)U增得到豬A

2、rf基因家族6個(gè)成員的全長編碼區(qū)及部分非編碼區(qū)cDNA序列，并對其進(jìn)行了生物信息學(xué)的分析。其中Arf1-3編碼區(qū)全長為546bp，編碼181個(gè)氨基酸；Arf4，5編碼區(qū)為543 bp，編碼180個(gè)氨基酸；Arf6編碼區(qū)為528bp，編碼175個(gè)氨基酸。
　　 豬Arf1 CDS核苷酸序列與人，小鼠，大鼠的同源基因的相似性分別為90％，88％和88％，其氨基酸序列與人，小鼠，大鼠相似性均為100％；豬Arf2 CDS核苷酸序列與小

3、鼠，大鼠的同源基因的相似性都為89％，其氨基酸序列與小鼠，大鼠相似性均為99％；豬Arf3 CDS核苷酸序列與人，小鼠，大鼠的同源基因的相似性分別為94％，91％和90％，其氨基酸序列與人，小鼠，大鼠相似性均為99％。
　　 豬Arf4 CDS核苷酸序列與人，小鼠，大鼠的同源基因的相似性分別為95％，94％和93％，其氨基酸序列與人，小鼠，大鼠相似性度分別為96％，98％和98％；豬Arf5 CDS核苷酸序列與人，小鼠，大鼠的同

4、源基因的相似性分別為95％，93％和93％，其氨基酸序列與人，小鼠，大鼠相似性度均為100％。
　　 豬Arf6 CDS核苷酸序列與人，小鼠，大鼠的同源基因的相似性均為96％，其氨基酸序列與人，小鼠，大鼠相似性度均為100％。
　　 2．通過搜索NCBI數(shù)據(jù)庫，以及實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增部分內(nèi)含子，最后拼接獲得豬Arf1-6的基因組序列。豬Arf1-3，全基因組都包含五個(gè)外顯子四個(gè)內(nèi)含子；豬Arf4，5，全基因組包含六個(gè)外顯子五個(gè)內(nèi)含

5、子，和第一類有較大差別；豬Arf6基因組序列只包含兩個(gè)外顯子，一個(gè)內(nèi)含子，與其他兩類差別較大，編碼區(qū)包含在一個(gè)外顯子中，無內(nèi)含子間隔。各類別內(nèi)基因之間編碼區(qū)外顯子大小完全一致，基因序列結(jié)構(gòu)高度一致，外顯子內(nèi)含子交界處都符合GT/AG規(guī)則。
　　 3．利用輻射雜種板技術(shù)和電子定位技術(shù)將Arf1-6分別定位在14q21-q22，12p14，5p12-q11，13q21.1，18q24，1q21-q27，豬-人比較基因組圖譜證實(shí)這兩個(gè)