東亞飛蝗免疫與繁殖相關(guān)基因表達(dá)分析.pdf

1、東亞飛蝗是世界性的農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)，對(duì)農(nóng)業(yè)危害嚴(yán)重。線紋折麻蠅（Blaesoxipha lapidosa）是一種蝗蟲(chóng)寄生性蠅類(lèi)，可寄生多種蝗蟲(chóng)。本文通過(guò)尋找東亞飛蝗免疫與繁殖相關(guān)表達(dá)基因，來(lái)研究線紋折麻蠅幼蟲(chóng)與東亞飛蝗的寄生關(guān)系，以及東亞飛蝗免疫與繁殖之間的權(quán)衡關(guān)系，為更好的理解東亞飛蝗在生態(tài)環(huán)境中的適應(yīng)策略提供理論基礎(chǔ)。
　　本文利用第二代高通量測(cè)序技術(shù)，對(duì)注射葡聚微珠、人工感染藤黃微球菌、人工寄生線紋折麻蠅幼蟲(chóng)后的東亞飛蝗雌成蟲(chóng)的卵巢

2、與脂肪體混合建庫(kù)測(cè)序，獲得8G的東亞飛蝗卵巢與脂肪體混合的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)。并采用兩種方法----無(wú)參拼接法和有參拼接法對(duì)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行拼接，通過(guò)Trinity軟件獲得54,740條unigenes，通過(guò)Cufflinks軟件獲得38,181條unigenes。然后對(duì)所有的unigenes進(jìn)行注釋。為了探究線紋折麻蠅寄生后，東亞飛蝗在免疫與繁殖方面的基因表達(dá)差異，分別進(jìn)行了葡聚微珠、藤黃微球菌、線紋折麻蠅處理4小時(shí)和6天的東亞飛蝗雌成蟲(chóng)的

3、卵巢和脂肪體混合建庫(kù)，進(jìn)行數(shù)字表達(dá)譜測(cè)序，并做兩次DGE測(cè)序重復(fù)。通過(guò)對(duì)這12個(gè)DGE的比較共獲得61條序列，包含四個(gè)方面的內(nèi)容：能量、異物識(shí)別、免疫和繁殖。能量相關(guān)基因是昆蟲(chóng)儲(chǔ)存蛋白（Hexamerin-like protein）。異物識(shí)別相關(guān)基因是革蘭氏陰性菌表面識(shí)別蛋白（GNBP），革蘭氏陽(yáng)性菌表面識(shí)別蛋白（PGRP），凝集素（Lectin）和載脂蛋白-3b（Apolipophorin-3b）。免疫相關(guān)基因是雙翅殺菌肽（Lm-di

4、ptericin），絲氨酸蛋白酶（Serine proteinase），磷酸絲氨酸蛋白磷酸酶（Phosphoserine phosphatase），絲氨酸蛋白酶抑制劑前體（Serpin precursor），絲氨酸蛋白酶抑制劑（Serpin），酚氧化酶原（Pro-phenoloxidase），酚氧化酶亞基（Phenoloxidase subunit A3），溶菌酶（Lysozyme），細(xì)胞色素P450（Cytochrome P450），

5、toll類(lèi)似蛋白（Tolloid-like protein2），toll蛋白（Protein toll），toll蛋白受體（Toll-like receptor）。繁殖相關(guān)基因是保幼激素（Juvenile hormone），卵黃原蛋白（Vitellogenin）。并且比較了篩選得到的差異基因的表達(dá)值，用以預(yù)測(cè)差異基因的功能，發(fā)現(xiàn)藤黃微球菌在進(jìn)入東亞飛蝗體內(nèi)4小時(shí)，東亞飛蝗體內(nèi)的殺菌作用便達(dá)到高峰期，但包囊反應(yīng)在4小時(shí)還未有明顯反應(yīng)，要比