不同豬種免疫功能及免疫相關基因表達差異研究.pdf

1、本研究以我國培育品種中畜黑豬和大白豬為研究對象，對其白細胞總數(shù)、血清IgG、IL-12、IFN-γ濃度、中性粒細胞NBT還原力等免疫指標進行比較；采用DDRT-PCR技術對血液、脾臟組織基因差異表達進行研究；并對部分差異表達序列進行了電子延伸和RT-PCR驗證。其目的在于闡明中外不同豬種抗病力不同的免疫學機理和分子基礎，為進一步研究差異表達基因功能奠定基礎。研究結果如下： 1.中畜黑豬血清IgG、IL-12、IFN-γ水平顯著高

2、于大白豬(P＜0.05或P＜0.01)；白細胞總數(shù)、中性粒細胞NBT還原力、外周血液單核細胞培養(yǎng)上清的IgG、IL-12等指標品種間差異不顯著。 2.大白豬180日齡重與中畜黑豬差異顯著(P＜0.05)，出生重、斷奶重、下網(wǎng)重及180日齡背膘厚等生產(chǎn)性能指標則無顯著性差異。 3.對免疫指標間相關性進行分析發(fā)現(xiàn)：血液IgG濃度與白細胞總數(shù)、外周血單個核細胞培養(yǎng)上清IFN-γ相關性較低(r=0.157，0.191)，與血清、

3、外周血單個核細胞培養(yǎng)上清IL-12濃度及血清IFN-γ成負相關(r=-0.305，-0.267，-0.242)；中性粒細胞NBT還原力與血清IL-12、IFN-γ濃度正相關(r=0.481，0.515)；血清IL-12、IFN-γ間存在正相關關系(r=0.643)。 4.對免疫指標與生產(chǎn)性能指標相關性分析得知，血清IgG濃度與下網(wǎng)重正相關(r=0.251)，而與180日齡體重成負相關(r=-0.157)；中性粒細胞NBT還原力與

4、180日齡體重成負相關(r=-0.256)；白細胞總數(shù)與出生重、斷奶重正相關(r=0.291，0.263)，而與下網(wǎng)重、180日齡體重及背膘厚負相關(r=-0.192，-0.333)；血清IL-12、IFN-γ濃度和斷奶重、下網(wǎng)重及180日齡體重負相關(r=-0.108/-0.296；-0.401/-0.607；-0.242/-0.473)，與出生重和180日齡背膘厚正相關(r=0.131/0.276；0.130/0.280)。

5、 5.利用DDRT-PCR技術從中畜黑豬和大白豬血液分離得到56條差異表達片段，其中17條反Norherning雜交驗證為陽性。5條在中畜黑豬血液特異性表達，4條在中畜黑豬表達水平高于大白豬，7條在大白豬血液特異性表達，1條在大白豬血液表達水平高于中畜黑豬。對陽性片段進行測序，用blast軟件進行同源性檢索，其中6條與已知基因同源：差異表達片段BD2、BD16與豬細胞分裂周期20mRNA同源(90﹪，87﹪)，差異表達片段BD4與鼠上皮

6、膜蛋白2同源(99﹪)，差異表達片段BD8與豬MHCⅠ同源(92﹪)，差異表達片段BD10與鼠18S核糖體RNA同源(98﹪)，差異表達片段BD12與亮氨酸氨基肽酶同源(91﹪)；其余為未知序列。 6.利用DDRT-PCR技術從中畜黑豬和大白豬脾臟分離得到62條差異表達片段，其中17條反Norherning雜交驗證為陽性。8條在中畜黑豬脾臟特異性表達，1條在中畜黑豬脾臟表達水平高于大白豬，6條在大白豬脾臟特異性表達，2條在大白豬

7、脾臟表達水平高于中畜黑豬。對陽性片段進行測序，用blast軟件進行同源性檢索，其中2條與已知基因同源：差異表達片段SD2與鼠188核糖體RNA同源(98﹪)，差異表達片段BD14與豬CC趨化性細胞因子受體基因同源(85﹪)；其余為未知序列。 7.對差異表達片段SD1(245bp)、SD11(443bp)進行了電子延伸，分別得到1278和648bp序列；根據(jù)延伸的序列設計引物，進行RT-PCR驗證，實際擴增到一條969bp片段和三