γ-氨基丁酸對(duì)斷喙后雛雞免疫功能及細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、為研究γ-氨基丁酸(GABA)對(duì)斷喙應(yīng)激條件下雛雞免疫功能及其脾臟腫瘤壞死因子-α(Tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)、白細(xì)胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)和細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Fas基因mRNA表達(dá)量的影響，進(jìn)行如下試驗(yàn)，旨在探索緩解斷喙應(yīng)激的方法。
　　 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
　　 選取1日齡體重均勻的健康固始雞公雛36

2、0只，隨機(jī)分為A、B、C、D、E5個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)。其中A、B、C為斷喙組，飲水中分別添加40mg/kg、60mg/kg和80mg/kg水平GABA；D組不斷喙，不添加GABA；E組斷喙，不添加GABA。7日齡斷喙，于斷喙后1d、3d、5d、7d心臟采血，處死，分離出免疫器官。
　　 試驗(yàn)一γ-氨基丁酸對(duì)斷喙后雛雞免疫功能的影響
　　 于斷喙后的1d、3d、5d、7d從每個(gè)處理每重復(fù)取2只雞，稱活體重，心臟采血，分離血

3、清，-20℃保存，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)、CD3+、CD4+、IgG、TNF-α、IL-1β和IL-6血清中的含量；分離免疫器官并稱重，計(jì)算免疫器官指數(shù)。結(jié)果表明：斷喙對(duì)雛雞造成一定應(yīng)激，斷喙組雛雞血清ACTH水平明顯高于未斷喙組，而添加GABA顯著下調(diào)雛雞血清ACTH水平(P<0.05)；添加80mg/kgGABA顯著提高了脾臟指數(shù)，不同處理對(duì)雛雞胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)無(wú)顯著影響；此外，添加GA

4、BA顯著提高了CD3+和CD4+水平；不同水平GABA對(duì)斷喙后雛雞血清IgG水平無(wú)顯著影響；斷喙應(yīng)激引起了IL-1β、IL-6和TNF-α血清中含量的升高，斷喙后第1、5天血清中IL-1β水平顯著高于未斷喙組，添加80mg/kgGABA顯著降低了血清中IL-1β含量；與未斷喙組相比，斷喙后第1和7天血清TNF-α和IL-6含量均顯著升高，添加80mg/kgGABA后顯著降低。
　　 試驗(yàn)二γ-氨基丁酸對(duì)斷喙后雛雞脾臟細(xì)胞因子及細(xì)

5、胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)量的影響
　　 于免疫后的1d、3d、5d和7d從每個(gè)處理每重復(fù)取2只雞，分離脾臟，提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄出cDNA，用SYBRGreenⅠ做染料，以GAPDH為參照基因，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)IL-1、IL-6和TNF-α的相對(duì)表達(dá)量以及抗凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Fas的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果表明：斷喙后第1、5天，添加80mg/kgGABA顯著降低了IL-1β在脾臟中的表達(dá)(P<0.05)；斷喙應(yīng)激造成

6、雛雞脾臟中TNF-α的表達(dá)量顯著升高，斷喙后第1、5天，添加GABA組脾臟中TNF-α的表達(dá)量顯著低于斷喙未添加GABA組(P<0.05)；此外，斷喙后第3天，添加80mg/kgGABA組雛雞脾臟中IL-6的表達(dá)量顯著低于斷喙未添加GABA組(P<0.05)；斷喙應(yīng)激后第1、3、7天脾臟中促凋亡基因FasmRNA表達(dá)量顯著高于未斷喙組，添加GABA后下降，且隨GABA劑量加大而進(jìn)一步降低，添加80mg/kgGABA可輕度上調(diào)抗凋亡基因B