γ-氨基丁酸在膽管癌細(xì)胞中的作用機(jī)制及相關(guān)效應(yīng)基因的探討.pdf

1、目的：探討膽管癌組織細(xì)胞中γ-氨基丁酸發(fā)揮抑制腫瘤生長作用的相關(guān)效應(yīng)基因。
　　方法：1、收集43例膽管癌患者的癌組織標(biāo)本，并同期行膽管修復(fù)的12例膽道損傷患者的正常膽管組織標(biāo)本作為對(duì)照。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測膽管癌及正常膽管組織中STAT3、磷酸化 STAT3（p-stat3）、抗凋亡蛋白（Survivin）及環(huán)氧化物酶2（COX-2）蛋白的表達(dá)。2、培養(yǎng)QBC939膽管癌細(xì)胞株，分為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、GABA治療組、GABA+ph

2、aclofen(B受體拮抗劑)控制組、AG490（JAK/STAT3信號(hào)通路受體拮抗劑）控制組。采用MTT法檢查細(xì)胞增殖活性，流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡情況，并用免疫組織化學(xué)法、免疫蛋白印記法、RT-PCR檢測p-stat3、Survivin及COX-2蛋白的表達(dá)。3、將QBC939細(xì)胞接種至裸鼠體內(nèi)培養(yǎng)移植瘤模型，分為GABA治療組及空白對(duì)照組，對(duì)移植瘤進(jìn)行免疫組化及WB法檢測各蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：1、在人膽管癌組織標(biāo)本中STAT3、

3、p-STAT3、survivin及 cox-2蛋白陽性表達(dá)率分別為69.8％（30/43）、65.1%（28/43）、72.1%（31/43）、79.1%（34/43）；在正常膽管組織中的陽性表達(dá)率分別為41.7%（5/12）、8.3%（1/12）、16.7%（2/12）、41.7%（5/12）。p-STAT3、Survivin及COX-2蛋白在膽管癌組織中的陽性表達(dá)率顯著高于正常膽管組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X2=12.136,9.8

4、11,4.679,P<0.05）
　　2、GABA控制組及AG490控制組培養(yǎng)細(xì)胞株較對(duì)照組，腫瘤細(xì)胞增殖活性下降，凋亡率增加，應(yīng)用phaclofen組腫瘤細(xì)胞增殖活性及凋亡率與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。WB、RT-PCR及免疫組化檢測可見GABA及AG490控制組p-STAT3、Survivin及COX-2蛋白表達(dá)量較對(duì)照組明顯下降，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。3、與空白組相比，治療組中免疫組化及WB檢測