Salubrinal協(xié)同雷帕霉素抑制人膽管癌細胞的作用及其機制.pdf

1、目的：研究真核翻譯起始因子2α（eukaryotic translation initiation factors2，eIF2α）抑制劑salubrinal（sal）協(xié)同雷帕霉素（rapamycin，rap）對人膽管癌細胞的抑制效果及其分子機制。
　　方法：培養(yǎng)人膽管癌細胞系QBC939和RBE細胞，用rap抑制膽管癌細胞mTOR信號通路，采用eIF2α抑制劑sal單獨或與rap聯(lián)合處理細胞、Bcl-xL抑制劑ABT-737單獨或

2、與rap聯(lián)合處理細胞，通過向裸鼠皮下注射QBC939實現(xiàn)荷瘤，荷瘤后給不同實驗組加相應(yīng)的藥物進行干預(yù)，監(jiān)測小鼠荷瘤效果，用免疫印跡分析藥物干預(yù)后腫瘤細胞和成瘤癌組織中相關(guān)分子以及凋亡相關(guān)分子PARP、Cleaved Caspase-3表達水平，用CCK-8檢測細胞增殖速率，免疫組化分析藥物干預(yù)對小鼠荷瘤組織增殖的影響。
　　結(jié)果：（1）Rap抑制CCA細胞增殖：免疫印跡（Western blot）分析結(jié)果說明rap可以抑制CCA細

3、胞中mTOR通路的活化，CCK-8檢測證實rap對QBC939和RBE細胞的增殖起抑制作用，并且呈時間依賴性抑制（P<0.05）；此外，rap未引起QBC939和RBE細胞明顯凋亡（數(shù)據(jù)未展示）；（2）Sal抑制CCA細胞增殖：Western blot結(jié)果表明eIF2α/ATF4信號通路在CCA細胞中呈過度活化狀態(tài)，并且sal可以抑制eIF2α的活性， CCK-8檢測證實sal對QBC939和RBE細胞的增殖起抑制作用，并且呈時間依賴性

4、抑制（P<0.05）；此外，sal未引起QBC939和RBE細胞明顯凋亡（數(shù)據(jù)未展示）；（3）Sal抑制CCA細胞成瘤：在體內(nèi)實驗中，sal抑制QBC939在裸鼠體內(nèi)的荷瘤能力，并通過免疫組化證實sal抑制QBC939細胞體內(nèi)細胞增殖能力；（4）Sal和rap聯(lián)合應(yīng)用抑制CCA細胞成瘤：在裸鼠體內(nèi)sal和rap單獨干預(yù)抑制QBC939細胞的成瘤，二者聯(lián)合干預(yù)協(xié)同抑制QBC939細胞的成瘤；（5）Sal和rap聯(lián)合應(yīng)用協(xié)同抑制CCA細胞成

5、瘤的機制：免疫組化證實sal和rap聯(lián)合干預(yù)比單獨sal或rap干預(yù)表現(xiàn)出對荷瘤的QBC939細胞生長更強的抑制作用；在體外實驗中，CCK-8分析結(jié)果提示sal和rap對QBC939細胞增殖有協(xié)同抑制作用（P<0.05）。用Western blot分析表明在QBC939細胞中sal處理不僅可以下調(diào)p-AKT的表達還可消除rap誘導(dǎo)的p-AKT表達上調(diào)；在體外實驗中，Western blot結(jié)果表明sal和rap單獨或聯(lián)合應(yīng)用未引起QBC

6、939和RBE細胞中PARP和Caspase-3的活化剪切；而且在體內(nèi)實驗中，Western blot結(jié)果證實sal或rap單獨干預(yù)未引起荷瘤的QBC939中PARP和Caspase-3的活化剪切，而聯(lián)合應(yīng)用時引起了PARP和Caspase-3明顯的活化剪切，并且sal處理可以消除rap誘導(dǎo)的p-AKT和Bcl-xL表達上調(diào)；用Bcl-xL抑制劑ABT-737處理后抑制QBC939細胞成瘤，并且 ABT-737和rap聯(lián)合應(yīng)用比ABT-

7、737或rap單獨干預(yù)表現(xiàn)出對QBC939細胞成瘤的更強抑制效應(yīng)；Western blot結(jié)果表明在QBC939成瘤組織中，ABT-737和rap聯(lián)合應(yīng)用引起了PARP和Caspase-3明顯的活化剪切；Western blot結(jié)果證實，ABT-737和rap聯(lián)合應(yīng)用在培養(yǎng)的QBC939細胞中引起了PARP和Caspase-3明顯的活化剪切。
　　結(jié)論：Sal和rap聯(lián)合應(yīng)用對膽管癌細胞有協(xié)同的抑制效應(yīng)；Sal和rap可以部分通過