采用mRNA差異顯示技術(shù)分離東亞飛蝗幼蟲(chóng)抗藥性相關(guān)基因的研究.pdf

1、東亞飛蝗是我國(guó)重要農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)之一，對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)危害極其嚴(yán)重。我國(guó)目前控制蝗蟲(chóng)的手段主要是采用化學(xué)藥劑防治為主，由于大量使用化學(xué)農(nóng)藥，東亞飛蝗對(duì)常用的殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生抗藥性的問(wèn)題已經(jīng)引起了有關(guān)植保部門(mén)的注意，因此，對(duì)其抗藥性系統(tǒng)的研究具有非常重要的理論意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。 本文采用mRNA差異顯示PCR技術(shù)，對(duì)比了東亞飛蝗幼蟲(chóng)在受到氯氰菊酯殺蟲(chóng)劑的誘導(dǎo)后，基因表達(dá)發(fā)生的變化。通過(guò)對(duì)差異片段的回收，克隆測(cè)Northern點(diǎn)雜交驗(yàn)證，最終確定了

2、4個(gè)誘導(dǎo)后差異表達(dá)的真陽(yáng)性cDNA片段，其長(zhǎng)度為260-400bp不等。經(jīng)GenBank同源性分析發(fā)現(xiàn)，這4個(gè)片段的氨基酸翻譯序列分別與不同物種的不同氨基酸序列有較高的同源性。YA21-260翻譯的氨基酸序列與土壤微生物(Solibacter usitatus Ellin6076)的抗吖啶黃蛋白(Acriflavin：resistapce protein)有29％的同源性(E值為5.5)；YA22-280翻譯的氨基酸序列與碩大利什曼原蟲(chóng)

3、(Leishmania major)保守假設(shè)性蛋白(1aypothetical protein conserved)有29％的同源性(E值為6.9)；YG21-280翻譯的氨基酸序列與鼠瘧疾寄生蟲(chóng)(Plasmodium yoelii yoelii)的DNA聚合酶epsilon催化亞單位(DNA polymerase epsilon catalytic subunit)有32％的同源性(E值9.2)，YG23-400翻譯的氨基酸序列與象甲