湖羊高繁殖力相關(guān)基因mRNA表達水平與多態(tài)性分析.pdf

1、家畜的繁殖性狀是重要的經(jīng)濟性狀之一。由于綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀遺傳力低只有0.1左右，通過常規(guī)選擇方法難以提高，因此尋找控制排卵數(shù)乃至產(chǎn)羔數(shù)的主效基因研究，已成為各國綿羊育種學家關(guān)注的焦點。
　　 湖羊作為我國著名的多胎性地方綿羊品種，具有四季發(fā)情，每胎的產(chǎn)羔率高(平均為230％)等特點。因此本研究以湖羊為主要研究對象，以GDF9、INHBB和Smad2基因作為湖羊高繁殖力性狀的候選基因進行分析，并從分子水平探索湖羊多胎性狀的分子遺傳機

2、理，以充分利用湖羊的多胎性能，為綿羊繁殖力的標記輔助選擇和育種提供理論依據(jù)。
　　 本文主要采用RT-PCR和實時熒光定量PCR對湖羊GDF9、INHBB、Smad2的組織表達、發(fā)情期單羔和多羔湖羊卵巢組織mRNA表達水平進行了研究；用PCR-RFLP法對湖羊GDF9和INHBB的多態(tài)性進行了分析，結(jié)果如下：
　　 1.組織表達結(jié)果顯示：GDF9、INHBB和Smad2基因在湖羊下丘腦、垂體、卵巢、子宮、輸卵管、心、肝、

3、脾、肺、腎組織中均有表達，說明GDF9、INHBB和Smad2基因不僅在湖羊的生殖器官中起著重要作用，可能對其他器官更具有普遍意義的作用。
　　 2.定量研究結(jié)果表明GDF9mRNA和INHBBmRNA在發(fā)情期多羔湖羊卵巢中的表達水平顯著高于單羔湖羊(P＜0.05)，表明GDF9mRNA和INHBBmRNA表達水平與湖羊的繁殖性狀有一定的關(guān)系，GDF9mRNA和INHBBmRNA的高表達量可能是引起多羔湖羊較高的產(chǎn)羔數(shù)的原因之一

4、。
　　 3.定量研究結(jié)果表明Smad2mRNA在發(fā)情期單羔和多羔湖羊卵巢組織中表達差異不顯著(P＞0.05)，說明Smad2mRNA表達水平與湖羊的繁殖性狀沒有直接關(guān)系。
　　 4.本研究設(shè)計了9對引物擴增了GDF9基因的幾乎全長，克隆測序沒有發(fā)現(xiàn)突變位點，李碧俠等(2003)采用PCR-SSCP方法發(fā)現(xiàn)在小尾寒羊、湖羊、多賽特羊和薩?？搜虻腉DF9cDNA的第152bp處發(fā)生單堿基改變(A→G)，并導致了氨基酸的改變

5、（天冬酰胺→天冬氨酸），本研究用PCR-RFLP方法對GDF9基因此處的突變進行了檢測，在所研究的47只湖羊群體中并無發(fā)現(xiàn)此突變，另外測序結(jié)果中也未發(fā)現(xiàn)該突變。
　　 5.克隆測序發(fā)現(xiàn)INHBB基因外顯子2第391bp處有1個A→C的單堿基突變，該突變導致第131位氨基酸由絲氨酸改變?yōu)榫彼幔籌NHBB基因外顯子2第766bp處和第767bp處分別發(fā)生了C→G突變和G-→C突變，此兩處突變導致第256位氨基酸由精氨酸改變?yōu)楸彼?/p>