湖羊高繁殖力相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平與多態(tài)性分析.pdf

1、家畜的繁殖性狀是重要的經(jīng)濟(jì)性狀之一。由于綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀遺傳力低只有0.1左右，通過(guò)常規(guī)選擇方法難以提高，因此尋找控制排卵數(shù)乃至產(chǎn)羔數(shù)的主效基因研究，已成為各國(guó)綿羊育種學(xué)家關(guān)注的焦點(diǎn)。
　　 湖羊作為我國(guó)著名的多胎性地方綿羊品種，具有四季發(fā)情，每胎的產(chǎn)羔率高(平均為230％)等特點(diǎn)。因此本研究以湖羊?yàn)橹饕芯繉?duì)象，以GDF9、INHBB和Smad2基因作為湖羊高繁殖力性狀的候選基因進(jìn)行分析，并從分子水平探索湖羊多胎性狀的分子遺傳機(jī)

2、理，以充分利用湖羊的多胎性能，為綿羊繁殖力的標(biāo)記輔助選擇和育種提供理論依據(jù)。
　　 本文主要采用RT-PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)湖羊GDF9、INHBB、Smad2的組織表達(dá)、發(fā)情期單羔和多羔湖羊卵巢組織mRNA表達(dá)水平進(jìn)行了研究；用PCR-RFLP法對(duì)湖羊GDF9和INHBB的多態(tài)性進(jìn)行了分析，結(jié)果如下：
　　 1.組織表達(dá)結(jié)果顯示：GDF9、INHBB和Smad2基因在湖羊下丘腦、垂體、卵巢、子宮、輸卵管、心、肝、

3、脾、肺、腎組織中均有表達(dá)，說(shuō)明GDF9、INHBB和Smad2基因不僅在湖羊的生殖器官中起著重要作用，可能對(duì)其他器官更具有普遍意義的作用。
　　 2.定量研究結(jié)果表明GDF9mRNA和INHBBmRNA在發(fā)情期多羔湖羊卵巢中的表達(dá)水平顯著高于單羔湖羊(P＜0.05)，表明GDF9mRNA和INHBBmRNA表達(dá)水平與湖羊的繁殖性狀有一定的關(guān)系，GDF9mRNA和INHBBmRNA的高表達(dá)量可能是引起多羔湖羊較高的產(chǎn)羔數(shù)的原因之一

4、。
　　 3.定量研究結(jié)果表明Smad2mRNA在發(fā)情期單羔和多羔湖羊卵巢組織中表達(dá)差異不顯著(P＞0.05)，說(shuō)明Smad2mRNA表達(dá)水平與湖羊的繁殖性狀沒(méi)有直接關(guān)系。
　　 4.本研究設(shè)計(jì)了9對(duì)引物擴(kuò)增了GDF9基因的幾乎全長(zhǎng)，克隆測(cè)序沒(méi)有發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)，李碧俠等(2003)采用PCR-SSCP方法發(fā)現(xiàn)在小尾寒羊、湖羊、多賽特羊和薩福克羊的GDF9cDNA的第152bp處發(fā)生單堿基改變(A→G)，并導(dǎo)致了氨基酸的改變

5、（天冬酰胺→天冬氨酸），本研究用PCR-RFLP方法對(duì)GDF9基因此處的突變進(jìn)行了檢測(cè)，在所研究的47只湖羊群體中并無(wú)發(fā)現(xiàn)此突變，另外測(cè)序結(jié)果中也未發(fā)現(xiàn)該突變。
　　 5.克隆測(cè)序發(fā)現(xiàn)INHBB基因外顯子2第391bp處有1個(gè)A→C的單堿基突變，該突變導(dǎo)致第131位氨基酸由絲氨酸改變?yōu)榫彼?；INHBB基因外顯子2第766bp處和第767bp處分別發(fā)生了C→G突變和G-→C突變，此兩處突變導(dǎo)致第256位氨基酸由精氨酸改變?yōu)楸彼?/p>