東亞飛蝗海藻糖酶基因的克隆與表達分析.pdf

1、海藻糖是一種由兩個葡萄糖分子組成的非還原性二糖,廣泛存在于各種生物中,包括細菌、真菌、植物及已知所有種類的昆蟲中,是昆蟲血淋巴中主要的糖類(大約占80％~90%)和能量物質(zhì)。海藻糖既是一種貯藏性糖類,又是應激代謝的重要產(chǎn)物,在干旱、脫水特別是冷凍、高溫和氧化等不良條件下,對生物大分子有很好的保護作用。海藻糖酶可以特異性地將一分子海藻糖水解為兩分子葡萄糖而被利用,鑒于海藻糖酶在生物有機體能量代謝過程中的重要作用,近年來許多生物化學家致力于

2、研發(fā)基于海藻糖酶抑制劑的新型農(nóng)藥,試圖通過阻斷有機體內(nèi)海藻糖的水解,來達到殺蟲和抑菌的目的。海藻糖酶是海藻糖分解代謝過程中的一個關鍵酶。雖然有關昆蟲海藻糖酶基因的研究已經(jīng)比較多,大量編碼海藻糖酶的cDNA序列也得到了克隆,但是東亞飛蝗作為一種世界性的農(nóng)業(yè)害蟲,目前尚無相關研究報道。本研究采用RT-PCR和RACE方法從東亞飛蝗(Locusta migratoria manilensi)中克隆了一個可溶性海藻糖酶基因(縮寫名為LmTre)

3、的全長cDNA序列(GenBank登錄號:FJ795020),并分析了該基因在不同組織的表達特征。獲得的cDNA全長1953bp,其中包括1686bp的開放閱讀框,共編碼561個氨基酸,預測的分子量和等電點分別為65579.82 Daltons和6.66,信號肽和跨膜分析顯示此蛋白屬于可溶性蛋白。該氨基酸序列和已經(jīng)公布的其他昆蟲的海藻糖酶氨基酸序列有較高的相似性(41～48%)。本研究通過半定量RT-PCR研究了LmTre的組織表達情況