番木瓜采后果實成熟特異表達基因的研究.pdf

1、本研究旨在分離番木瓜采后在果實中特異表達的基因，進而鑒定這些基因在番木瓜果實成熟過程中的作用。對采后自然成熟番木瓜果實的硬度變化情況進行了研究。結(jié)果表明，番木瓜果實采后自然成熟條件下硬度呈逐漸下降趨勢。將采后番木瓜果實按果皮顏色可分為六級，其中一級硬度為14.7kg/cm2，六級為2.0kg/cm2，結(jié)合Paull(1996)對采后番木瓜乙烯變化的結(jié)論：乙烯含量在果色破色前(一級)最微，到開始變軟(三至四級)時達到高峰以后迅速下降，而此

2、時番木瓜還沒有達到食用風(fēng)味最佳，也沒有達到成熟，因此相比而言我們使用硬度為指標(biāo)進行選擇比較方便可行。當(dāng)番木瓜為五級時，食用風(fēng)味最佳，糖分和芳香味等指標(biāo)都達到最好的程度。根據(jù)這一結(jié)果，選取采后一級和五級番木瓜果實(1號、2號)，以2號作為檢測子、1號作為驅(qū)動子，進行正向抑制差減雜交。用T/A法構(gòu)建正向差減文庫(含221個克隆)。采用PCR方法篩選正向差減文庫獲得138個重組子，對這些重組子進行array(反向Northern點雜交)，篩選

3、出在1號和2號中表達有明顯差異的cDNA片段67個，再對這些篩選出的cDNA插入片段進行了序列測定，結(jié)果表明：共有58個cDNA的測序結(jié)果可進行BLASTn和BLASTx分析。其中：22個cDNA序列與數(shù)據(jù)庫中功能未知的核酸序列的同源性達60～90％，占總cDNA片段的38％；32個cDNA序列推導(dǎo)出的氨基酸序列與功能己知的cDNA推導(dǎo)出的氨基酸序列同源性達60～100％(比較的核酸長度均在200bp以上)，約占62％；在這些cDNA序

4、列中，有1個cDNA序列與己發(fā)表的來源于番木瓜的已知功能的基因序列同源性高達97％，還有兩個序列與番木瓜未知功能的基因具有95％的同源率，其他的序列很大一部分也代表了與果實成熟基因有關(guān)。 本研究采用SSH和反向Northern點雜交相結(jié)合的方法對番木瓜采后果實中基因表達的變化進行了研究，獲得了67個有明顯表達差異的EST序列，初步分析了番木瓜采后成熟與品質(zhì)形成的遺傳學(xué)基礎(chǔ)，并得到了一批未知的新基因片段，為克隆和鑒定新功能基因奠定