‘金冠’果實采后成熟衰老過程中的蛋白表達研究.pdf

1、本研究以‘金冠’果實為試驗材料，運用雙向電泳技術(shù)和串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)對不同成熟階段蘋果果實進行差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究，通過對差異表達蛋白功能鑒定和蛋白圖譜變化的生物信息學(xué)分析，深入探討蘋果果實成熟衰老的機理，為果實品質(zhì)改良以及采后的品質(zhì)調(diào)控提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.建立了適合蘋果果實總蛋白質(zhì)分離的雙向電泳體系。以改良的酚抽法提取總蛋白，用17 cm pH4-7的IPG膠條進行等電聚焦電泳，聚焦時間為60000 VH，使用12

2、％的SDS-PAGE進行垂直電泳分離蛋白，并采用膠體考馬斯亮藍G-250染色，獲得了分辨率高、重復(fù)性好、蛋白點清晰、總蛋白點達400以上的雙向電泳圖譜;這些蛋白點主要分布在pH5～7，分子量15kDa～95kDa之間。該體系的建立為后續(xù)的蘋果果實蛋白質(zhì)組學(xué)的研究和分析奠定了基礎(chǔ)。
　　2.以‘金冠’蘋果果實為試材，采用建立的雙向電泳技術(shù)對蘋果進行差異蛋白質(zhì)組學(xué)的分析，結(jié)果顯示不同成熟階段和貯藏期‘金冠’果實的蛋白質(zhì)圖譜存在顯著差異

3、。
　　用PDQuest軟件對以雙向電泳圖譜進行分析獲得了55個差異點，經(jīng)串聯(lián)質(zhì)譜和數(shù)據(jù)庫檢索成功鑒定出53個2-fold以上的蛋白差異點。這些蛋白根據(jù)其功能可分為6類，包括脅迫反應(yīng)和防御(49.0％)、能量和代謝(34.0％)、成熟和衰老(5.6％)、信號傳導(dǎo)(3.8％)、細胞結(jié)構(gòu)(3.8％)和蛋白合成(3.8％);其中與脅迫反應(yīng)和防御相關(guān)的蛋白所占比例最大，其次是能量和代謝中的蛋白。差異表達蛋白亞細胞定位結(jié)果顯示，53個差異蛋