雷公藤氯內(nèi)酯醇通過(guò)改善突觸可塑性、調(diào)節(jié)Aβ代謝、抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng)減輕5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠的認(rèn)知損害.pdf

1、【目的】β淀粉樣蛋白(β-amyloid,Aβ)代謝異常是阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)發(fā)病機(jī)制的核心環(huán)節(jié)。Aβ的生成和清除失平衡導(dǎo)致其在腦內(nèi)異常增多并聚集,觸發(fā)了一系列病理生理級(jí)聯(lián)反應(yīng),包括突觸功能障礙、膠質(zhì)細(xì)胞活化誘發(fā)的炎癥反應(yīng)等,最終導(dǎo)致神經(jīng)元損傷并引起癡呆。本研究以5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠為動(dòng)物模型,觀察雷公藤氯內(nèi)酯醇(tripchlorolide,T4)對(duì)該轉(zhuǎn)基因小鼠認(rèn)知功能的影響,并分別從突觸可塑性

2、、Aβ代謝和神經(jīng)炎癥的角度較為深入的探討T4作用的可能分子機(jī)制。
　　【方法】SPF級(jí)5月齡雄性5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠,各自分別隨機(jī)分為溶媒對(duì)照組(0.9％NaCl)、T4處理組(5μg/kg,25μg/kg),每組8~11只,腹腔注射給藥,隔日1次,共60天。
　　1、采用Y迷宮和Morris水迷宮兩種行為學(xué)實(shí)驗(yàn),檢測(cè)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能。
　　2、電鏡下觀察海馬CA1區(qū)突觸超微結(jié)構(gòu);Western blot法

3、檢測(cè)海馬和皮層突觸可塑性相關(guān)蛋白synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1/NMDAR1、p-CaMKIIα/CaMKIIα、p-CREB/CREB和PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路中pAkt/Akt、pmTOR/mTOR的表達(dá)。
　　3、通過(guò)免疫組化、ELISA和Western blot檢測(cè)腦內(nèi)Aβ及其生成和降解的關(guān)鍵酶(包括β分泌酶、α分泌酶、NEP和IDE)的表達(dá)。
　　4、通過(guò)免疫組化觀察腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)

4、胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化情況,通過(guò)Western blot檢測(cè)腦內(nèi)GFAP的表達(dá),利用real-time PCR檢測(cè)海馬炎癥介質(zhì)的mRNA水平。
　　【結(jié)果】
　　1、T4可改善5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠視空間學(xué)習(xí)記憶障礙。
　　2、T4可改善5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠海馬突觸超微結(jié)構(gòu)異常,增加腦內(nèi)突觸可塑性相關(guān)蛋白的表達(dá),同時(shí)增加pAkt/Akt、pmTOR/mTOR的表達(dá)。
　　3、T4能夠減少5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)Aβ

5、沉積,降低BACE1及其酶切產(chǎn)物sAPP-β、CTF-β的表達(dá),增加NEP的表達(dá),但對(duì)APP、CTF-α、ADAM10、ADAM17、IDE的表達(dá)無(wú)影響。
　　4、T4能夠抑制5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞活化,下調(diào)炎癥介質(zhì)IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β、CCL2、NOS2的mRNA水平,但對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化無(wú)明顯影響。
　　【結(jié)論】5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠存在視空間學(xué)習(xí)記憶障礙、突觸功能損害、Aβ沉積和神經(jīng)炎