針刺促SAMP8小鼠海馬神經(jīng)元突觸可塑性的能量轉(zhuǎn)運機制研究.pdf

1、目的：
　　本研究以阿爾茲海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）模型SAMP8小鼠為研究對象，通過觀察針刺對海馬神經(jīng)元突觸可塑性，以及葡萄糖、乳酸含量與其轉(zhuǎn)運體的影響，從神經(jīng)元能量物質(zhì)轉(zhuǎn)運的角度探討針刺促海馬神經(jīng)元突觸可塑性機制，為針刺治療AD提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　采用Morris水迷宮進行行為學檢測，篩選出43只學習記憶能力減退的SAMP8小鼠作為AD動物模型，隨機分為SAMP8組與SAMP

2、8+針刺組。以20只同月齡SAMR1小鼠作為對照。
　　選取“百會”、“涌泉”進行針刺治療，每天治療一次，每次20分鐘，5天為一個療程，每個療程結(jié)束后休息2天，共治療8療程。治療結(jié)束后，采用水迷宮進行定位航行、空間探索實驗，采用透射電鏡觀察小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元突觸后致密帶（post synaptic density，PSD）厚度、突觸間隙寬度、突觸界面曲率的變化，充分評價針刺治療效應；運用在體腦微透析聯(lián)合ISCUS檢測技術(shù)，檢測

3、腦部海馬區(qū)葡萄糖、乳酸等能量底物含量，并取海馬組織，運用免疫組化、蛋白免疫印跡法檢測海馬葡萄糖轉(zhuǎn)運體3（glucose transporter3,GLUT3）、單羧酸轉(zhuǎn)運體2（monocarboxylate transporter2,MCT2）、單羧酸轉(zhuǎn)運體4（monocarboxylate transporter4,MCT4）總表達量及亞區(qū)變化。
　　結(jié)果：
　　1．學習記憶能力結(jié)果。
　　Morris水迷宮結(jié)果提示

4、，與SAMR1組相比，SAMP8組逃避潛伏期顯著延長（P＜0.01），第1天游泳總路程增加（P＜0.05），第2天至第5天游泳總路程顯著增加（P＜0.01）；目標象限游泳路程百分比、目標象限游泳時間百分比顯著下降（P＜0.01），穿越平臺次數(shù)、穿越有效區(qū)次數(shù)顯著減少（P＜0.01），提示SAMP8組小鼠學習能力、記憶能力均下降，符合AD的病例特征變化。經(jīng)過8個療程的針刺治療，與SAMP8組相比，SAMP8+針刺組第4天、第5天逃避潛伏期

5、、游泳總路程縮短（P＜0.05）；目標象限游泳路程百分比、目標象限游泳時間百分比升高（P＜0.05），穿越平臺次數(shù)差異不具有統(tǒng)計學差異（P＞0.05），穿越有效區(qū)次數(shù)增加（P＜0.05）。表明針刺有效地改善了SAMP8小鼠的學習記憶能力。
　　2．突觸可塑性結(jié)果。
　　電鏡結(jié)果提示，與SAMR1組相比，SAMP8組小鼠海馬神經(jīng)元PSD厚度顯著降低，突觸突觸間隙寬度顯著增加；經(jīng)過8個療程的針刺治療，與SAMP8組相比，SAMP

6、8+針刺組小鼠海馬神經(jīng)元PSD厚度增加（P＜0.05），突觸間隙寬度減?。≒＜0.05）。表明針刺可以促進海馬神經(jīng)元突觸結(jié)構(gòu)可塑性的發(fā)揮。
　　3．海馬乳酸、葡萄糖、丙酮酸檢測結(jié)果。
　　探針回收率結(jié)果表明，CMA7探針對SAMP8小鼠海馬乳酸的回收率為16.25％，葡萄糖的回收率為19.18%，提示符合實驗技術(shù)要求。與SAMR1組相比，SAMP8組小鼠海馬乳酸、葡萄糖、丙酮酸含量均顯著降低（P＜0.01）。經(jīng)過8個療程的針

7、刺治療，與SAMP8組相比，SAMP8+針刺組小鼠海馬乳酸、葡萄糖、丙酮酸含量均顯著降低（P＜0.01）。
　　4．海馬能量底物轉(zhuǎn)運蛋白檢測結(jié)果。
　　蛋白免疫印跡結(jié)果表明，與SAMR1組相比，SAMP8組GLUT3、MCT2表達顯著降低（P＜0.01），MCT4表達差異不具有統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；海馬亞區(qū)免疫組化檢測結(jié)果表明，GLUT3表達的降低出現(xiàn)在CA1亞區(qū)（P＜0.01）、DG亞區(qū)（P＜0.01）以及CA3亞區(qū)

8、（P＜0.05）；MCT2表達的降低出現(xiàn)在CA1亞區(qū)（P＜0.01）、CA3亞區(qū)（P＜0.01）和DG亞區(qū)（P＜0.01）；而MCT4的表達在CA1亞區(qū)顯著降低（P＜0.01）。經(jīng)過8個療程的針刺治療，與SAMP8組相比，SAMP8+針刺組小鼠海馬GLUT3、MCT2總表達量顯著升高（P＜0.01），MCT4總表達量差異不具有統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；亞區(qū)免疫組化結(jié)果提示，GLUT3表達的升高出現(xiàn)在CA1亞區(qū)（P＜0.01）、DG亞區(qū)

9、（P＜0.01）和CA3區(qū)（P＜0.05）；MCT2表達的升高出現(xiàn)在CA1亞區(qū)（P＜0.01）和DG亞區(qū)（P＜0.05）；MCT4在CA1亞區(qū)出現(xiàn)顯著升高（P＜0.05）。
　　MCT4/MCT2比值結(jié)果表明，與SAMR1組相比，SAMP8組海馬CA1、CA3、DG亞區(qū)MCT4/MCT2比值改變不具有統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；經(jīng)過8個療程的針刺治療，與SAMP8組相比，SAMP8+針刺組海馬CA1亞區(qū)MCT4/MCT2比值顯著降

10、低（P＜0.05），CA3、DG亞區(qū)MCT4/MCT2比值改變不具有統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1．針刺可以促進SAMP8小鼠海馬神經(jīng)元突觸結(jié)構(gòu)可塑性，改善學習記憶能力；
　　2．針刺可以降低SAMP8小鼠海馬細胞間液乳酸、葡萄糖、丙酮酸含量；
　　3．針刺可能通過調(diào)控SAMP8小鼠海馬GLUT3、MCT2、MCT4表達，改善神經(jīng)元底物攝取能力，以促進神經(jīng)元突觸可塑性的發(fā)揮，提高SAMP8小鼠學