MePEG-PLA聚合物膠束的制備表征及細(xì)胞攝取機(jī)理初步研究.pdf

1、兩親性嵌段共聚物聚乙二醇-聚乳酸（MePEG5000-PLA，嵌段比為1：1）由于其生物可降解性及良好的生物相容性，已被廣泛用于藥物控釋、靶向等藥物載體的研究。聚合物膠束獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)以及紫杉醇的抗癌活性使得對(duì)MePEG-PLA的研究具有重要意義。本文將MePEG-PLA用于包裹紫杉醇，一方面對(duì)難溶性藥物紫杉醇起到增溶作用，另一方面提高了其殺傷腫瘤細(xì)胞的能力，從而降低毒副作用。將MePEG-PLA修飾量子點(diǎn)(QDs)，使油溶性QDs轉(zhuǎn)化為水

2、溶性QDs，可很好的對(duì)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。本文主要開展了以下工作： （1）通過FT-IR、1H-NMR、GPC等手段對(duì)聚合物進(jìn)行表征。采用芘探針熒光光譜法測(cè)定了兩親性聚合物的臨界膠束濃度，為1.5 mg/L。比較了成膜法和自乳化溶劑蒸發(fā)法制備的載紫杉醇的聚合物的粒徑、形態(tài)及包封率，結(jié)果顯示成膜法制備的載紫杉醇聚合物粒徑在200 nm左右且分布不均勻，而自乳化溶劑蒸發(fā)法制備的載紫杉醇的聚合物膠束粒徑為27±3 nm，粒徑分布均勻。采用透

3、射電子顯微鏡觀察膠束的形貌，發(fā)現(xiàn)為具有核-殼結(jié)構(gòu)的球形，通過高效液相色譜（HPLC）測(cè)得載紫杉醇的聚合物包封率為4.23％。通過自乳化法制備的熒光標(biāo)記的聚合物膠束平均粒徑為40±4 nm，透射電鏡結(jié)果也顯示為具有核-殼結(jié)構(gòu)的球形。 （2）對(duì)制備的載紫杉醇MePEG-PLA聚合物膠束進(jìn)行體外釋藥研究并對(duì)釋藥行為進(jìn)行藥物釋放數(shù)學(xué)模型擬合。其結(jié)果符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)模型：Q=126.60-131.67e-0.044t。用MTT法觀察載紫杉醇

4、膠束對(duì)人卵巢癌細(xì)胞A2780的殺傷率，結(jié)果顯示空白MePEG-PLA聚合物對(duì)細(xì)胞幾乎沒有毒性，自乳化溶劑蒸發(fā)法制備的載紫杉醇膠束比游離紫杉醇具有更強(qiáng)的殺傷作用。成膜法制備的載紫杉醇聚合物膠束因其粒徑較大，不易進(jìn)細(xì)胞，其細(xì)胞殺傷作用與游離紫杉醇差別不大。 （3）用尼羅紅標(biāo)記MePEG-PLA膠束，用于細(xì)胞攝取機(jī)理研究，通過熒光倒置顯微鏡、熒光分光光度計(jì)、激光共聚焦、全內(nèi)反射熒光顯微鏡等各種方法定性、定量地研究A2780細(xì)胞對(duì)聚合物

5、膠束的攝取作用，探討其攝取機(jī)理。結(jié)果表明聚合物膠束進(jìn)細(xì)胞是一個(gè)濃度、時(shí)間、能量依賴性的過程，全內(nèi)反射熒光顯微鏡結(jié)果顯示膠束納米藥物載體進(jìn)細(xì)胞過程中有內(nèi)吞囊泡的出現(xiàn)，初步判斷其細(xì)胞攝取過程中至少存在內(nèi)吞機(jī)制。激光共聚焦研究聚合物膠束在亞細(xì)胞器的分布，結(jié)果顯示與線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)共定位，溶酶體中也有部分定位。初步判斷有粒子從溶酶體中逃逸出來。熒光標(biāo)記聚合物膠束的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明4 ℃存放一個(gè)月后，熒光強(qiáng)度沒有顯著的變化，但是納米粒子發(fā)生了團(tuán)聚

6、。 （4）用MePEG-PLA聚合物對(duì)QDs進(jìn)行修飾。采用改進(jìn)的自乳化溶劑蒸發(fā)法制備的載CdSe/ZnS QDs的MePEG-PLA 聚合物膠束，粒徑為100 nm左右，熒光強(qiáng)度在60左右，多分散性指數(shù)在0.14和0.40之間，zeta電位為- 20 mV左右。透射電鏡下顯示為囊泡狀，且無團(tuán)聚或黏附現(xiàn)象。包裹后的量子點(diǎn)的發(fā)射波長(zhǎng)相對(duì)未經(jīng)包裹的量子點(diǎn)有約2 nm的紅移。體外熒光穩(wěn)定性試驗(yàn)證明包裹后的量子點(diǎn)在4 ℃存放7天后仍然有很