阿霉素-姜黃素共輸送脂質納米載藥系統(tǒng)抗肝癌研究.pdf

1、原發(fā)性肝細胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）是嚴重危害人類健康的重大疾病，由于肝癌細胞通常存在著原發(fā)性耐藥，目前用于治療原發(fā)性肝癌的化療藥物非常有限，單一化療藥物的治療效果較差。阿霉素（Doxorubicin，DOX）是治療肝癌的一線臨床用藥，但是存在治療窗窄、心臟毒性大、耐藥性強等問題，嚴重制約其臨床應用。姜黃素（Curcumin，Cur）來源于姜科植物姜黃，是一種有應用前景的化療增敏劑，但其存在穩(wěn)定性差

2、、生物利用度低等問題。近年來，有文獻報道采用納米載藥系統(tǒng)對化療藥物和化療增敏劑進行共輸送，以克服腫瘤多藥耐藥（Multidrug resistance，MDR），增強化療藥物對肺癌、乳腺癌等腫瘤細胞的殺傷作用，提高化療藥物抗腫瘤治療效果。但是，相關研究主要局限于細胞實驗，缺乏在體研究結果，以及對共輸送納米載藥系統(tǒng)增敏機制的研究。
　　本文工作基于國家納米藥物工程技術研究中心在脂質納米載藥系統(tǒng)多年研究基礎上，制備阿霉素-姜黃素共輸送

3、脂質納米載藥系統(tǒng)（Doxorubicin and curcumin codelivery lipid nanoparticles，DOX/Cur-NPs），并將其應用于原發(fā)性肝癌治療，系統(tǒng)研究了DOX/Cur-NPs體外抑制肝癌細胞增殖及促凋亡活性、體內治療原發(fā)性肝癌的藥效，并對其抗肝癌增敏機制進行了探討，開展的主要研究工作如下：
　?。?）研究了姜黃素脂質納米載藥系統(tǒng)（Curcumin-loaded lipid nanopart

4、icles，Cur-NPs）的制備及處方優(yōu)化。根據(jù)溶解度實驗和單因素考察法篩選出Cur-NPs的處方組成及高壓均質工藝，通過四因素五水平中心復合設計（Central composite design，CCD）進行處方優(yōu)化。
　　（2）在Cur-NPs的基礎上，制備了DOX/Cur-NPs，并進行了表征。DOX/Cur-NPs粒徑在90 nm左右，PDI<0.3，zeta電位90％；DOX/C

5、ur-NPs穩(wěn)定性良好；差示掃描量熱（DSC）及X-射線衍射（XRD）結果表明DOX與Cur以無定型形式存在于載體中；體外釋放結果表明DOX和Cur呈現(xiàn)緩釋現(xiàn)象，DOX釋放行為符合 Ritger-Peppas方程，而 Cur釋放行為符合 Higuchi和Ritger-Peppas方程。
　?。?）研究了 DOX/Cur-NPs體外抑制肝癌細胞增殖及促凋亡活性。噻唑藍比色法（MTT法）研究顯示空白脂質納米載藥系統(tǒng)對人肝癌細胞HepG

6、2和人正常肝細胞L02基本無毒性；不同載藥比例的DOX/Cur-NPs(2:1,1:1,1:2)均具有協(xié)同抑制肝癌細胞增殖和減輕DOX對正常肝細胞毒性的作用，其中，DOX與Cur為1:1時具有最佳協(xié)同效應；DOX/Cur-NPs中DOX與Cur協(xié)同作用促進了HepG2細胞的凋亡。
　　（4）開展了 DOX/Cur-NPs治療原發(fā)性肝癌的藥效學研究。采用二乙基亞硝胺（Diethylnitrosamine，DEN）誘導雄性昆明小鼠產生

7、原發(fā)性肝癌，以體重變化、生存率、肝功能、相對肝重量、肝表面結節(jié)數(shù)目和最大結節(jié)直徑、病理學觀察為指標，結果顯示，DOX/Cur-NPs具有協(xié)同抑制HCC生長的效果；同時，在造模過程給予一定劑量Cur-NPs，發(fā)現(xiàn)其對原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展具有明顯的減緩效應。
　　（5）對DOX/Cur-NPs的化療增敏機制進行了探討。采用實時聚合酶鏈式反應（RT-PCR）、Western blotting及免疫組化方法研究DOX/Cur-NPs對HCC

8、凋亡、增殖、血管發(fā)生、耐藥等途徑中的關鍵mRNA及蛋白表達的影響，結果表明DOX/Cur-NPs通過促進凋亡、抑制增殖和血管發(fā)生、逆轉MDR實現(xiàn)協(xié)同治療HCC的效果。MTT實驗結果進一步證明DOX/Cur-NPs對MDR的逆轉作用。Cur-NPs對HCC的預防機制在于抑制血管發(fā)生和缺氧。
　　本論文研究結果表明，DOX/Cur-NPs增強了對原發(fā)性肝癌的治療作用，且具有良好的安全性，實現(xiàn)了協(xié)同抗癌的效果。其增敏機制可能是通過促進原