地黃提取物對阿霉素腎病大鼠腎臟的保護(hù)作用.pdf

1、目的： 1、觀察阿霉素腎病大鼠腎組織中MMP-2及TGF-β1的表達(dá)情況。 2、研究地黃提取物對阿霉素腎病大鼠的血、尿生化及病理的影響。 3、研究地黃提取物對阿霉素腎病大鼠腎組織中MMP－2及TGF-β1表達(dá)的影響。 方法： 1、動物模型的制備與干預(yù)：50只SD(Sprague-Dawlay)雄性大鼠，按體重大小隨機(jī)分為：(1)正常對照組(C組，10只)：采用一次性經(jīng)尾靜脈注射等量生理鹽水。

2、 (2)模型組(40只)：按照Bertani的方法，大鼠尾靜脈內(nèi)一次性注射阿霉素溶液，給藥量7.5mg/kg造模，2周后留取24h尿液進(jìn)行尿蛋白定量檢測，24h尿蛋白定量＞30mg為腎病模犁成立[2]，達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)者為32只，隨后將模型組隨機(jī)分為：腎病模型對照組(M組，16只)、地黃提取物組(D組，16只)。D組于造模2周后開始予2g/ml的地黃提取物(10g/Kg)每同一次灌胃，灌胃共8周；C組和M組2周后每天予等量的生理鹽水灌胃，灌胃

3、共8周。 2、生化指標(biāo)檢測：大鼠實驗前及實驗2、4、6、8、10周末，留24小時尿液測定24小時尿蛋白含量，實驗10周末取血測定血白蛋白、膽固醇、血尿素氮、血肌酐。 3、腎臟病理學(xué)檢查：常規(guī)石蠟切片、HE染色、光鏡下作形態(tài)學(xué)觀察。 4、免疫組織化學(xué)染色法檢測MMP-2及TGF-β1蛋白表達(dá)：采用SABC法免疫組織化學(xué)方法染色組織切片，MMP-2及TGF-β1免疫組化結(jié)果均使用美國IPP5.0(ImagePro-p

4、lus5.0)專業(yè)圖象分析軟件測定平均光密度值。 5、RT-PCR法檢測MMP-2及TGF-β1的基因表達(dá)：余下腎臟組織保存于-80℃冰箱中，Trizol法提取其總RNA，RT-PCR法檢測腎臟組織內(nèi)MMP-2及TGF-β1基因表達(dá)水平。 結(jié)果： 1、血液、尿液生化指標(biāo)比較：實驗6周末，與M組比較，D組24h尿蛋白開始明顯減少，有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。實驗10周末，與C組比較，M組大鼠24h尿蛋白定量、

5、TC、Scr和BUN水平均顯著上升，分別為[(60.50±18.50)vs(10.50±3.50)mg/24h，(2.45±0.32)vs(1.13±0.50)mmol/L，(50.00±11.20)vs(37.80±6.60)umol/L，(8.30±1.50)vs(6.80±1.55)mmol/L，p＜0.01]，而血白蛋白則顯著降低為(25.20±2.25)vs(38.37±1.65)g/L，p＜0.01；與M組比較，D組大鼠24

6、h尿蛋白定量、TC、Scr和BUN水平均顯著下降，分別為[(50.20±14.00)vs(60.50±18.50)mg/24h，(1.82±0.28)vs(2.45±0.32)mmol/L，(45.30±12.00)vs(50.00±11.20)umol/L，(7.20±1.10)vs(8.30±1.50)p＜0.05]，而血白蛋白則顯著升高為(29.30±2.28)vs(25.20±2.25)g/Lp＜0.05。 2、病理結(jié)果

7、：C組大鼠腎皮質(zhì)區(qū)腎小球毛細(xì)血管襻開放較好，無ECM聚集；M組大鼠腎組織光鏡下可見部分毛細(xì)血管腔變窄甚至完全閉塞，腎小囊擴(kuò)張，囊壁增厚，球囊粘連，可見ECM聚集，部分腎小管管腔內(nèi)可見蛋白管型；D組腎小球體積增大，系膜細(xì)胞增多不明顯，腎小球毛細(xì)血管受壓，部分管腔狹窄，無明顯ECM聚集。(圖1)。 3、腎組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：與C組比較，M組腎組織MMP-2蛋白表達(dá)水平顯著減少，為(0.08±0.01)vs(0.16±0.02)

8、p＜0.01，與M組比較，D組腎組織MMP-2蛋白表達(dá)水平顯著增加，為(0.12±0.01)vs(0.08±0.01)p＜0.01。與C組比較，M組TGF-β1蛋白表達(dá)明顯增多，為(0.59±0.02)vs(0.30±0.01)P＜0.01，D組TGF-β1蛋白表達(dá)較M組明顯下降為(0.47±0.01)vs(0.59±0.02)P＜0.01。 4、腎組織中MMP-2及TGF-β1mRNA表達(dá)情況：與C組比較，M組腎組織MMP-2

9、mRNA表達(dá)水平顯著減少，為(0.39±0.07)vs(0.79±0.11)p＜0.01，與M組比較，D組腎組織MMP-2mRNA表達(dá)水平增加，為(0.52±0.09)vs(0.39±0.07)p＜0.01。與C組相比，M組腎組織中TGF-β1mRNA表達(dá)明顯升高，為(1.91±0.50)vs(1.01±0.03)P＜0.01，D組腎組織中TGF-β1mRNA表達(dá)較M組明顯下調(diào)，為(1.20±0.17)vs(1.91±0.50)P＜0.

10、01。 5、相關(guān)性分析：腎組織中TGF-β1蛋白表達(dá)與MMP-2蛋白的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，腎組織中TGF-B1mRNA表達(dá)與MMP-2mRNA的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。 結(jié)論： 1、阿霉素腎病大鼠腎組織中MMP-2表達(dá)下降，TGF-β1表達(dá)上升，提示MMP-2、TGF-β1參與了阿霉素腎病的進(jìn)展過程。 2、地黃提取物對阿霉素腎病大鼠腎臟有保護(hù)作用，可能是通過上調(diào)腎組織MMP-2的表達(dá)，下調(diào)腎組織TGF-β1的表達(dá)