蓮子心提取物對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　1、通過(guò)建立糖尿病腎病(DN)大鼠為動(dòng)物模型，從血、尿生化、腎臟病理組織形態(tài)等，從“量-效”和“時(shí)-效”角度研究蓮子心提取物對(duì)糖尿病腎病的作用；
　　2、探討蓮子心提取物對(duì)糖尿病腎病腎臟保護(hù)的作用機(jī)制，觀察蓮子心提取物體內(nèi)對(duì)糖尿病腎病(DN)大鼠腎臟轉(zhuǎn)錄活化蛋白-1(AP-1)、TGF-β1蛋白、p38MAPK、Smad7蛋白表達(dá)的影響；再通過(guò)體外培養(yǎng)腎小球系膜細(xì)胞(MC)，測(cè)定蓮子心提取物對(duì)MC細(xì)胞增殖、MC細(xì)

2、胞Smad7及TGF-β1蛋白表達(dá)的影響，從TGF-β1/Smad7、TGF-β1/p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑來(lái)探索蓮子心提取物對(duì)糖尿病腎病腎臟保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　方法一：通過(guò)尾靜脈注射鏈脲佐菌素(STZ)造成大鼠糖尿病腎病模型,蓮子心提取物連續(xù)給藥12周，從“時(shí)-效”和“量-效”角度研究蓮子心提取物對(duì)下列指標(biāo)的影響。
　　檢測(cè)指標(biāo)：（1）在給藥過(guò)程中每天觀察一般狀況及死亡情況；（2）每周稱(chēng)體重1次；（3）給藥4周、8

3、周、12周時(shí)分別檢測(cè)飲水量、24h尿量；取血檢測(cè)血糖(Glu)、肌酐(Crea)、尿素氮(BUN)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)；取尿檢測(cè)24h尿白蛋白定量、尿微量蛋白、尿肌酐、尿素氮。（4）連續(xù)給藥8周后，正常組大鼠處死5只，其余各組大鼠處死6只，在給藥12周后全部處死其余動(dòng)物。檢測(cè)指標(biāo)有：糖化血紅蛋白、總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高低密度脂蛋白(HDL-c、LDL-c)，大鼠腎臟、心臟、胸腺、脾臟重量及指數(shù)，腎臟PAS染

4、色觀察腎小球面積、PAS陽(yáng)性區(qū)域面積、PAS陽(yáng)性區(qū)域面積占腎小球面積百分比，腎臟病理組織觀察。
　　結(jié)果：
　　(1)控制血糖：本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蓮子心提取物在給藥4周、8周、12周均能明顯降低DN大鼠血糖。早期控制糖代謝紊亂至關(guān)重要，血糖控制良好可以糾正和預(yù)防腎臟病變，腎功能也得到改善。
　　(2)抑制腎臟肥大、降低尿蛋白、降低血肌酐、增加尿肌酐的排泄量、保護(hù)腎功能：本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：蓮子心提取物高劑量能顯著降低DN大鼠的

5、腎臟指數(shù)；中劑量或高劑量能不同程度增加24h尿液肌酐和尿素氮的含量、降低24h尿微量蛋白及尿蛋白定量；降低血清肌酐及糖化血紅蛋白含量；降低腎臟及胰腺病變發(fā)生率及病變程度；抑制和降低STZ所致DN大鼠腎小球系膜區(qū)增厚增寬和PAS陽(yáng)性組區(qū)域占腎小球面積的百分比，對(duì)DN大鼠腎臟有較好的保護(hù)作用，可緩解大鼠糖尿病腎病的進(jìn)程,并表現(xiàn)出一定的“時(shí)-效”和“量-效”關(guān)系。
　　(3)改善脂代謝紊亂：本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，蓮子心提取物長(zhǎng)期給藥能明顯降低

6、DN大鼠血清膽固醇、甘油三脂及LDL-c水平，同時(shí)升高HDL-c水平，對(duì)脂代謝有改善作用。
　　方法二：通過(guò)尾靜脈注射鏈脲佐菌素(STZ)造成大鼠糖尿病腎病模型,蓮子心提取物連續(xù)給藥12周，采腎組織標(biāo)本，采用免疫組化檢測(cè)AP-1蛋白含量、TGF-β1蛋白、p38MAPK(p-p38MAPK)及Smad7蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　結(jié)果顯示，蓮子心提取物干預(yù)DN大鼠后，腎組織TGF-β1、AP1、p38 MAPK表

7、達(dá)下調(diào)(P<0.05，P<0.01)，上調(diào)腎組織Smad7的表達(dá)(P<0.05，P<0.01)，并有一定的量效關(guān)系,結(jié)果提示該藥機(jī)制可能TGF-β1/Smad7或TGF-β1/p38 MAPK信號(hào)通路傳導(dǎo)有一定的調(diào)控作用。
　　方法三：通過(guò)培養(yǎng)腎系膜細(xì)胞（MC），利用MTT法測(cè)定MC細(xì)胞的增殖；ELISA法測(cè)定培養(yǎng)上清液Smad7的含量；RT-PCR方法檢測(cè)TGF-β1mRNA的表達(dá)，研究蓮子心提取物對(duì)上述指標(biāo)的影響。
　　

8、結(jié)果：
　　本研究結(jié)果顯示，和正常培養(yǎng)組比較,高糖培養(yǎng)組MC細(xì)胞增殖明顯；蓮子心提取物能明顯抑制高糖所致的MC細(xì)胞增殖；同時(shí)，與正常葡萄糖組比較，高糖培養(yǎng)組MC細(xì)胞上清中和TGF-β1mRNA的表達(dá)增加，MC細(xì)胞中Smad7基因表達(dá)下調(diào)(P　　蓮子心提取物干預(yù)后可降低高糖誘導(dǎo)的TGF-β1mRNA基因表達(dá)的增加，增加Smad7蛋白的表達(dá)，并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P　　本次實(shí)驗(yàn)在體