保元Ⅱ號對糖尿病腎病大鼠腎臟的保護作用.pdf

1、目的：糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病危害較大的微血管并發(fā)癥，也是致死、致殘的主要原因之一。據(jù)報道，在歐美國家，終末期腎病(end-stage renaldisease,ESRD)約有1/3為糖尿病所致，且75％為2型糖尿病。該病預(yù)后差，死亡率高，嚴重威脅人類的健康。目前國內(nèi)外對本病尚無理想的治療方法和藥物。 DN典型的病理改變?yōu)?。腎臟肥大、基底膜增厚、腎小球細胞外基質(zhì)成分積聚等，其發(fā)病機制主

2、要與高血糖、腎臟血流動力學(xué)異常、家族遺傳性等有關(guān)。近年來隨著分子生物學(xué)技術(shù)的進步，多項研究發(fā)現(xiàn)有多種細胞因子參與了DN發(fā)病進程。在這些細胞因子中，以轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)為核心因子，其作用涉及到腎小球血流動力學(xué)改變、細胞外基質(zhì)代謝、細胞增殖和細胞肥大等諸多方面。Smad蛋白是目前所知TGF-β受體的胞內(nèi)激酶底物，介導(dǎo)了TGF-D的胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。這二者在DN發(fā)生、發(fā)展過程中都起著重要的作用。 石家莊市中醫(yī)院腎內(nèi)科專家經(jīng)過多年臨

3、床探索，總結(jié)出的治療DN的有效驗方保元Ⅱ號(黃芪、當歸、冬蟲夏草、生地、山藥、山萸肉等)，采用益氣扶正，活血通絡(luò)的方法治療本病，取得了較好的療效。因此本實驗采用腹腔注射鏈尿佐菌素(STZ)的方法復(fù)制DN大鼠模型，觀察保元Ⅱ號對血糖、腎功能、血脂、腎臟形態(tài)及相關(guān)細胞因子TGF-β1和Smad表達的影響，探討本方的作用機理，為臨床治療DN提供科學(xué)的實驗依據(jù)。 方法：選用清潔級雄性健康SD大鼠50只，隨機抽10只為正常對照組(norm

4、al group，N)，其余40只按65mg·kg-1腹腔注射鏈尿佐菌素(STZ)，48h后尾尖取血，測定血糖，取尿測尿糖。血糖≥16.7mmol·L-1，尿蛋白陽性視為成膜。將30只成模大鼠隨機分為：糖尿病腎病模型組(DN-modolgroup，DN)、中藥保元II號治療組(BaoyuanⅡcapsule group，DN-Z)、苯那普利治療組(Benazepril group，DN-B)，n=10。各組均不給予任何降糖西藥。本實驗共

5、8周。于第8周用代謝籠收集24小時尿液，檢測24小時尿蛋白(urinary protein，Upro)定量和尿β2微球蛋白(urinary β2-MG)。最后一次給藥后，禁食8小時，股動脈取血，分離血清，檢測空腹血糖(fasting blood glucose，F(xiàn)BG)，尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)，血肌酐(serum creatinine，Scr)，血漿白蛋白(albumin，ALB)、血總膽固醇(tota

6、l cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)。無菌操作取腎臟，去掉包膜，取小塊的腎組織固定，甲醛固定用于觀察腎臟病理改變；液氮固定檢測TGF-β和Smad蛋白的表達。血、尿生化指標均用全自動生化分析儀測定。RT-PCR方法檢測TGF-β1和Smad2、Smad

7、3、和Smad7的表達。 結(jié)果: 1保元Ⅱ號對血、尿生化指標的影響 1.1保元Ⅱ號對FBG的影響DN組FBG(26.54±3.67)明顯高于N(6.1±0.81)組，有顯著性差異(p＜0.01)。經(jīng)用藥干預(yù)后，治療組與DN組相比無顯著性差異(p＞0.05)。DN-B組(26.31±3.16)與DN-Z組(25.87±3.42)相比無顯著性差異(p＞0.05)。 1.2保元II號對DN大鼠24小時Upro的

8、影響DN組(2.51±0.62)明顯高于N組(1.03±0.21)，有顯著性差異(p＜0.01)。經(jīng)用藥干預(yù)，DN-B(1.34±0.31)組和DN-Z組(1.35±0.29)均低于DN組，有顯著性差異(p＜0.01)。DN-Z組與DN-B組比較無顯著性差異(p＞0.05)。 1.3保元II號對DN大鼠血脂TC、TG、HDL和LDL的影響。 DN組TC(1.66±0.15)高于N組(1.19±0.14)，有顯著性差異(p

9、＜0.01)。DN-Z組(1.64±0.16)、DN-B組(1.64±0.17)同DN組相比無顯著性差異(p＞0.05)，DN-Z組和DN-B組相比無顯著性差異(p＞0.05)DN組TG(0.63±0.13)高于N組(0.51±0.09)，有顯著性差異(p＜0.01)。DN-Z組(0.57±0.11)與DN組相比明顯下降(p＜0.01)，有顯著差異。DN-B組(0.61±0.12)同DN組相比無顯著性差異(p＞0.05)；DN-Z組明顯

10、低于DN-B組，有顯著性差異(p＜0.01)。 DN組HDL(0.54±0.16)低于N組(0.61±0.07)，有顯著性差異(p＜0.01)。DN.Z組(0.59±0.13)與DN組相比明顯上升(p＜0.01)，有顯著差異。DN-B組(0.55±0.12)同DN組相比無顯著性差異(p＞0.05)；DN-Z組明顯高于DN-B組，有顯著性差異(p＜0.01)。 DN組LDL(1.05±0.16)高于N組(0.86±0.08

11、)，有顯著性差異(p＜0.01)。DN-Z組(0.97±0.15)與DN組相比明顯下降(p＜0.01)，有顯著差異。DN-B組(1.04±0.18)同DN組相比無顯著性差異(p＞0.05)；DN-Z組明顯低于DN-B組，有顯著性差異(p＜0.01)。 1.4保元Ⅱ號對DN大鼠BUN和Scr的影響與N組(5.14±0.58)相比，DN組BUN(25.13±2.02)明顯升高，有顯著性差異(p＜0.01)。治療組與DN組相比明顯下降

12、，有顯著性差異(p＜0.01)。DN-Z組(15.17±3.22)和DN-B組(15.13±2.42)之間無明顯差異(p＞0.05)。 DN組Scr(187.78±24.55)與N組(71.24±13.06)相比明顯升高，有顯著性差異(p＜0.01)。各治療組與DN組相比明顯下降，有顯著性差異(p＜0.01)。DN-Z組(93.83±8.24)和DN-B組(94.47±14.80)之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)。

13、1.5保元Ⅱ號對DN大鼠尿β2-MG的影響。 DN組尿β2-MG(0.540±0.033)明顯高于N組(0.078±0.006)，有顯著性差異(p＜0.01)。治療組與DN組相比下降，有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.01)。DN-Z組(0.362±0.029)和DN-B組(0.372±0.019)相比無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。 1.6保元Ⅱ號對DN大鼠血漿蛋白ALB的影響DN組(22.50±3.04)明顯低于N組(33.45±

14、4.55)，有顯著性差異(p＜0.01)。DN-Z組(27.96±2.64)明顯高于DN組，有顯著性差異(p＜0.01)。DN-B組(23.01±2.95)與DN組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。 2.保元Ⅱ號對DN大鼠腎臟病理變化的影響與正常組比較，藥物治療組與模型組皆出現(xiàn)腎小球體積明顯增大，腎小球系膜區(qū)擴張，細胞外基質(zhì)成分增多，陽性物質(zhì)沉積增多。尤其模型組，多數(shù)大鼠出現(xiàn)彌漫性系膜增生。DN-B組、DN-Z組皆能在一定程度上

15、改善系膜增生以及動脈病變的程度。 3.保元II號對DN大鼠TGF-β1和Smad2、Smad3、Smad7mRNA表達的影響與模型組相比較，DN-Z組和DN-B組腎臟中TGF-β1表達均有下降，Smad2和Smad3表達也有下調(diào)，DN-Z組和DN-B組Smad7表達較DN組有上升。 結(jié)論: 1.保元II號能夠減少尿蛋白的丟失，提高血漿蛋白含量，降低尿β2微球蛋白，降低尿素氮、血肌酐，降低甘油三酯、低密度脂蛋白，提