健脾補腎活血方對糖尿病大鼠腎臟保護作用的研究.pdf

1、目的：本研究通過腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)復制糖尿病大鼠模型，應用健脾補腎活血方對糖尿病大鼠進行干預治療，通過觀察該藥對糖尿病大鼠模型血糖、血脂、腎功能、24小時尿白蛋白排泄率、腎臟病理形態(tài)學、腎重/體重的比值、血漿及腎組織中Ang Ⅱ含量、以及腎組織中TGF-β1表達的改變，研究健脾補腎活血方對糖尿病大鼠腎臟的保護作用及其可能機制，為其臨床應用提供可靠的研究基礎。 方法：選用健康SD大鼠(雄性，體重180±20g)46只，普

2、通飼料適應性喂養(yǎng)1周，檢測血糖、尿糖均為陰性，按體重隨機分為正常組(10只)、模型組(12只)、苯那普利組(12只)、健脾補腎活血方組(12只)，除正常組外，其它三組均采用腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)復制糖尿病模型，造模72小時后測血糖超過16.7mmol/L即確定為糖尿病模型大鼠。正常組注射相當體積的檸檬酸緩沖液。造模第三天，模型組、苯那普利組、健脾補腎活血方組，分別給予自來水、苯那普利10 mg/kg、健脾補腎活血方灌胃7.5 mg

3、/kg，每日一次。正常組也給予相同體積的自來水灌胃。實驗期間，各組動物自由進食、飲水。于實驗第8周，大鼠用代謝籠留取24h尿液，用放射免疫法測定尿微量白蛋白，計算尿白蛋白排泄率(UAER)，并測尿肌酐(Ucr)。于第8周末，全部動物被處死，用全自動生化分析儀檢測各組大鼠血糖、總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)，計算內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)。用放免法測血漿AngⅡ含量。大鼠麻醉后，迅速取出雙腎，去包膜后

4、，雙腎稱重，并測腎重/體重比值。左腎固定后石蠟包埋，切成4μm厚的切片行HE巳染色和PAS染色。光鏡下觀察腎臟病理形態(tài)學變化。右腎于矢狀面縱向切開后，取部分右腎組織勻漿后離心，取上清備測腎組織Ang Ⅱ含量。右腎余組織置10％福爾馬林溶液中，常規(guī)固定，石蠟包埋切片備用，待用免疫組化法檢測TGF-β1在腎小球及腎小管的表達情況，并用病理圖像分析軟件進行半定量分析。 結果： (1)血糖：造模后糖尿病各組大鼠均出現(xiàn)血糖增高，與

5、正常組比較有顯著性差異，健脾補腎活血方組有一定的降糖作用，與模型組比較有顯著性差異，苯那普利組降糖效果不顯著，健脾補腎活血方組與其比較有顯著性差異。 (2)血脂：第8周末檢測血脂，除正常組外，其余各組均出現(xiàn)血脂增高，與正常組比較均有顯著性差異。苯那普利治療對血脂影響不大，與模型組比較無顯著性差異。健脾補腎活血方治療能降低TG和TC水平，與模型組比較有顯著性差異。 (3)腎功能：模型組BUN、Scr、Ccr與正常組比較有顯

6、著性差異。健脾補腎活血方組和苯那普利組均能降低BUN、Scr、Ccr水平，與模型組比較有顯著性差異，兩組間比較無顯著性差異。 (4)24h尿白蛋白排泄率：第8周時，模型組24h尿白蛋白排泄率明顯高于正常組，健脾補腎活血方組24h尿白蛋白排泄率明顯降低，與模型組比較有顯著性差異，與苯那普利組比較無統(tǒng)計學意義。 (5)腎重/體重的比值：模型組腎重/體重的比值明顯高于正常組。苯那普利組與健脾補腎活血方組腎重/體重的比值明顯低于

7、模型組，與模型組比較有顯著性差異。兩者之間無顯著性差異。 (6)血漿及腎組織中Ang Ⅱ含量：模型組血漿及腎組織中Ang Ⅱ含量均高于正常組。苯那普利組血漿及腎組織中Ang Ⅱ含量明顯低于模型組。健脾補腎活血方組Ang Ⅱ含量低于模型組，但高于苯那普利組。 (7)腎組織病理形態(tài)學觀察：模型組光鏡下可見腎小球體積增大，球囊增大呈分葉狀，腎小球毛細血管基底膜增厚，系膜細胞增生，系膜區(qū)增寬，系膜基質(zhì)PAS染色呈強陽性，腎小管上

8、皮細胞腫脹變性(見附圖12、13、14、15)。健脾補腎活血方組及苯那普利組大鼠腎組織病變?nèi)缒I小球基底膜增厚及系膜細胞增生比模型組有明顯改善，系膜區(qū)PAS染色陽性物質(zhì)明顯減少(見附圖16、17、18、19)。 (8)腎組織中TGF-β1免疫組化結果：正常大鼠的腎小球臟層上皮細胞和腎小管上皮細胞有少量TGF-β1陽性表達。模型組大鼠腎小管上皮細胞TGF-β1表達顯著增加，腎小球臟層上皮細胞TGF-β1表達也增加。健脾補腎活血方組和

9、苯那普利組較模型組的表達明顯減少，與模型組比較有明顯減少。健脾補腎活血方組和苯那普利組比較無明顯差異。 結論： 1.健脾補腎活血方可降低糖尿病大鼠血糖、改善脂代謝、降低BUN、Scr及Ccr，保護腎功能。 2.健脾補腎活血方阻止糖尿病大鼠腎臟肥大，改善腎臟形態(tài)結構的同時還可以降低血管緊張素水平和TGF-β1的表達，一定程度上可改善糖尿病的腎損害，延緩腎臟纖維化進程。 3.健脾補腎活血方對糖尿病大鼠模型的干