甘草提取液對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用.pdf

1、背景及目的：糖尿病腎病(diabetic nephropathy， DN； diabetic kidney disease， DKD)是糖尿病(diabetes mellitus，DM)常見(jiàn)的慢性微血管并發(fā)癥之一，也是導(dǎo)致終末期腎病(end stage renal disease， ESRD)的常見(jiàn)病因。因此探尋DN的發(fā)病機(jī)制和尋找早期防治藥物有非常重要的臨床意義和社會(huì)價(jià)值。DN的發(fā)病機(jī)制至今仍未完全闡明，近十余年隨著研究的不斷深入，發(fā)

2、現(xiàn)DN是在遺傳背景基礎(chǔ)上糖脂代謝紊亂、血流動(dòng)力學(xué)改變、氧化應(yīng)激、炎癥、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等多因素綜合作用的結(jié)果。既往研究證實(shí)，甘草具有抑制α-葡萄糖苷酶、降低血糖、抑制醛糖還原酶(AR)活性、抗氧化、抗炎等藥理作用，對(duì)腎功能有保護(hù)作用，但有關(guān)甘草對(duì)糖尿病微血管并發(fā)癥如糖尿病腎病的藥理作用及其機(jī)制的研究報(bào)道較少。為此，本研究應(yīng)用腹腔注射鏈脲佐菌素的方法復(fù)制大鼠糖尿病腎損傷模型，觀察甘草提取液對(duì)糖尿病腎損傷大鼠腎功能的保護(hù)作用，并從調(diào)節(jié)腎臟

3、AR活性、抗氧化應(yīng)激、抗炎方面探討甘草提取液抗糖尿病大鼠腎損傷、保護(hù)腎功能的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1．制備甘草提取液。
　　 2．分光光度法測(cè)定甘草提取液α-葡萄糖苷酶抑制活性。
　　 3．糖尿病大鼠模型的建立及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組：雄性Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，禁食12h，將鏈脲佐菌素(STZ)溶解于0.1mmol/L枸櫞酸鈉緩沖液(pH4.5)，按65mg/kg腹腔內(nèi)一次性注射STZ制作DM

4、大鼠模型，共有32只大鼠成模；成模大鼠隨機(jī)分為模型組和治療組，每組16只，治療組給予甘草提取液灌胃1次/d，每次1mL/100g體質(zhì)量，連續(xù)10周；另有16只正常Wistar大鼠為對(duì)照組。
　　 4．檢測(cè)指標(biāo)：于實(shí)驗(yàn)第2、4、6、8、10周末測(cè)定各組大鼠體重、葡萄糖氧化酶法測(cè)定空腹血糖(FBG)、考馬斯亮蘭法測(cè)定24h尿白蛋白量。于第10周末測(cè)定各組大鼠的腎質(zhì)量指數(shù)(KI)、親和層析法測(cè)定糖化血紅蛋白(GHbA1c)、速率法測(cè)定

5、尿、血肌酐(Scr)及血尿素氮(BUN)、高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定血清膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)、硫代巴比妥酸法測(cè)定血液及腎組織勻漿中丙二醛(MDA)含量、黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血液及腎組織勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)活性、比色法測(cè)定血液及腎組織勻漿中硒谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(SeGSHPx)活性、DL-甘油醛-NADPH-熒光分光光度法測(cè)定紅細(xì)胞及腎組織勻漿中醛糖還原酶(AR)活性、雙抗體夾心ELISA法測(cè)定24h尿單核細(xì)胞趨化

6、蛋白-1(MCP-1)含量、計(jì)算內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)。常規(guī)保存腎組織，組織切片，HE染色，光鏡下觀察腎組織形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)法觀察腎臟組織MCP-1的陽(yáng)性表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1．甘草提取液對(duì)α-葡萄糖苷酶活性抑制率為52.17％。
　　 2．動(dòng)物造模10周后，測(cè)模型組及治療組DM大鼠KI、FBG、GHbA1C、TC、TG、Scr、BUN、Ccr、24h尿白蛋白量、24h尿MCP-1量、血液及腎組

7、織勻漿中MDA含量、AR活性均明顯高于對(duì)照組（P均＜0.05），SOD、SeGSHPx活性均明顯低于對(duì)照組(P均＜0.05)。
　　 3．與模型組相比，治療組KI、FBG、GHbA1C、TC、TG、Scr、BUN、Ccr、24h尿白蛋白量、24h尿MCP-1量、血液及腎組織勻漿中MDA含量、AR活性均顯著降低（P均＜0.05），SOD、SeGSHPx活性均顯著升高（P均＜0，05）。
　　 4．光鏡下對(duì)照組腎組織未見(jiàn)明顯

8、改變，模型組腎小球體積和腎小球系膜面積都顯著增加，腎小管腫脹，部分腎小管上皮細(xì)胞空泡變性，腎間質(zhì)局灶炎性分布伴有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，治療組腎組織病變程度較模型組顯著減輕。免疫組化顯示MCP-1陽(yáng)性細(xì)胞胞漿染色為棕黃色。對(duì)照組腎臟組織未見(jiàn)MCP-1表達(dá)或僅有微量表達(dá)，模型組腎小球毛細(xì)血管袢、系膜區(qū)及腎小管MCP-1陽(yáng)性表達(dá)顯著增加，治療組腎小球毛細(xì)血管袢、系膜區(qū)及腎小管MCP-1陽(yáng)性表達(dá)明顯減弱（P均＜0.05）。
　　 結(jié)論：