真武湯對(duì)腎陽(yáng)虛腎衰模型大鼠腎組織AQP1表達(dá)影響研究.pdf

1、目的：
　　 本研究以分子生物學(xué)、形態(tài)學(xué)等檢測(cè)技術(shù)，觀察真武湯對(duì)腎陽(yáng)虛型慢性腎衰模型大鼠腎組織AQP1及腫瘤壞死因子（TNF-α）表達(dá)的影響，旨在從分子水平探討真武湯治療慢性腎衰水液代謝平衡紊亂的藥理作用機(jī)制，并為腎陽(yáng)虛證“氣化不利”的病理生理學(xué)機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 1.動(dòng)物造模及給藥：健康雄性Wistar大鼠30只，重量為220±20（g），由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，適應(yīng)性飼養(yǎng)3

2、天。隨機(jī)按體重分為對(duì)照組、模型組及真武湯組，每組10只。采用腺嘌呤灌胃法建立腎陽(yáng)虛慢性腎衰大鼠模型。從實(shí)驗(yàn)第1d起，模型組及真武湯組大鼠每日上午按10ml/kg/d腺嘌呤灌胃，對(duì)照組只進(jìn)行灌胃刺激，共21天。造模2周后，從造模的第3周開始，模型組及真武湯組大鼠每日上午灌服腺嘌呤的同時(shí)，開始每日下午分別灌服生理鹽水（按10ml/kg/d）和真武湯水煎液（按10ml/kg/d），連續(xù)21天。
　　 2.實(shí)驗(yàn)過程中觀察各組大鼠的一般狀

3、態(tài)改變；觀察平均體重變化；在動(dòng)物取材前1d，將大鼠至代謝籠留取大鼠24h尿液，測(cè)量24h尿量、尿比重變化。
　　 3.取材及指標(biāo)檢測(cè)：大鼠給予腹腔注射20％氨基甲酸乙酯（5ml/kg）進(jìn)行腹腔麻醉后，腹主動(dòng)脈取血2ml，用于檢測(cè)血Scr、BUN；摘取一側(cè)腎臟組織，進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)分析和免疫組化方法檢測(cè)組織AQP1、TNF-α表達(dá)，結(jié)果在IPP圖像分析系統(tǒng)下對(duì)陽(yáng)性表達(dá)部位進(jìn)行分析；取另一側(cè)腎臟，用于Western blot方法測(cè)定大

4、鼠腎組織AQP1蛋白表達(dá)，利用圖像分析技術(shù)對(duì)其表達(dá)水平進(jìn)行對(duì)比。
　　 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：計(jì)量資料用x±SD表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行ANOVA（完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因素方差分析）統(tǒng)計(jì)方法處理，P<0.05為有顯著性差異。
　　 結(jié)果：
　　 1.真武湯對(duì)腎陽(yáng)虛腎衰模型大鼠腎功能影響
　　 與對(duì)照組比較，模型組大鼠出現(xiàn)畏寒肢冷、活動(dòng)減少、食量減少、體重下降；尿量明顯增加，尿比重下降，血Scr、BU

5、N含量顯著增高（P<0.05）。腎組織HE染色光鏡下觀察可見，腎小球充血，囊腔擴(kuò)大，間質(zhì)大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維組織增生，腎小管代償性擴(kuò)張。真武湯組大鼠攝食較好、被毛較光澤、活動(dòng)力較強(qiáng)、反應(yīng)靈敏，體重均有不同程度增加，血Scr及BUN含量下降、尿量減少、尿比重增加（P<0.05）、腎組織光鏡觀察可見病理?yè)p傷明顯減輕。
　　 2.真武湯對(duì)腎陽(yáng)虛腎衰模型大鼠腎組織AQP1表達(dá)變化影響
　　 免疫組化方法檢測(cè)表明：與對(duì)照組比較，模

6、型組大鼠腎臟近曲小管上皮細(xì)胞胞膜和胞漿AQP1的表達(dá)明顯減弱，灰度值明顯降低（P<0.05）；真武湯組大鼠近曲小管上皮細(xì)胞胞膜和胞漿AQP1的表達(dá)較模型組明顯增強(qiáng)，灰度值明顯高于模型組（P<0.05）。western blot方法檢測(cè)顯示：模型組大鼠AQP1表達(dá)下降，條帶灰度值顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；真武湯組大鼠腎臟AQP1蛋白表達(dá)增加，表現(xiàn)為條帶寬，密度大，顏色深，灰度值顯著高于模型組（P<0.05）。
　　 3.真武

7、湯對(duì)腎陽(yáng)虛腎衰模型大鼠腎組織中TNF－α表達(dá)等影響。
　　 大鼠腎臟組織對(duì)照組、模型組、真武湯組腎間質(zhì)細(xì)胞胞膜和胞漿可見不同程度棕黃色顆粒；模型組大鼠腎間質(zhì)細(xì)胞胞膜胞漿TNF-α的表達(dá)較對(duì)照組明顯增加（P<0.05），真武湯組大鼠腎間質(zhì)細(xì)胞胞膜胞漿TNF-α的表達(dá)明顯較模型組減弱（P<0.05）。
　　 中醫(yī)理論的腎主水，主要體現(xiàn)在依靠腎的氣化作用“升清降濁”來(lái)維持機(jī)體的水液動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)腎陽(yáng)虛氣化功能減退時(shí)出現(xiàn)水液代謝障

8、礙。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：腎臟的氣化功能減退的原因之一，可能通過增加TNF-α表達(dá)，導(dǎo)致AQP1表達(dá)的下調(diào)，影響了腎臟的重吸收，真武湯能夠改善腎臟的此項(xiàng)功能。
　　 結(jié)論：
　　 1.腎陽(yáng)虛腎衰模型大鼠尿量增加，尿比重降低，血Scr及 BUN水平增加，腎組織病理可見明顯損傷，真武湯能夠使其逆轉(zhuǎn)。
　　 2.腎陽(yáng)虛腎衰模型大鼠腎組織AQP1表達(dá)下調(diào)；真武湯治療后可使AQP1表達(dá)上調(diào)。
　　 3.腎陽(yáng)虛腎衰模型大鼠