飼料、血液及尿液中多族藥物L(fēng)C-MS-MS檢測(cè)方法的建立和驗(yàn)證.pdf

1、動(dòng)物使用的飼料會(huì)對(duì)人類的公共健康產(chǎn)生重要的影響。動(dòng)物性飼料管理規(guī)定如藥品一樣，遠(yuǎn)比食用性產(chǎn)品的管理規(guī)定要嚴(yán)格，并且飼料在上市前需要進(jìn)行安全性和有效性的檢測(cè)考察。對(duì)于飼料的關(guān)注不僅僅是因?yàn)槭褂盟桂B(yǎng)動(dòng)物，而且還是為了彌補(bǔ)確保飼料和食物供應(yīng)安全的管理規(guī)定和系統(tǒng)的漏洞。盡管了解了動(dòng)物飼料對(duì)于公眾健康的重要性，然而是否需要將飼料管理制定成類似藥品管理那樣，還取決于該飼料的實(shí)際使用程度。本方法旨在同時(shí)篩查、確證和定量飼料中的更多的不同極性和解離程

2、度的獸藥。本方法使用D-SED聯(lián)合超聲提取，利用LC-MS/MS對(duì)多種目標(biāo)基質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。方法關(guān)注的是飼料中動(dòng)物源性食品自身的以及允許使用和禁止使用的藥品添加劑。該方法基于高選擇性和高靈敏性的LC-MS/MS，建立了飼料、尿液、血清和血漿這四種基質(zhì)中的分析方法。本方法實(shí)現(xiàn)了對(duì)于25個(gè)不同類別共200種禁止在飼料添加劑使用的獸藥進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)定量和確證，包括，β-內(nèi)酰胺類，β-激動(dòng)劑，β-阻斷劑，磺胺類，非甾體抗炎藥類，類固醇，喹諾酮類，諾酮

3、類，大環(huán)內(nèi)脂類，抗球蟲藥，哌啶類，胺類，青霉素類，糖苷類，氨基糖苷類，哌嗪類，嘌呤類，酰胺類，四環(huán)素類，咪唑類等。確證的依據(jù)是歐盟2002/657/EC規(guī)定，此規(guī)定包括了對(duì)方法的使用和結(jié)果的說明。確證標(biāo)準(zhǔn)采用如下指標(biāo)，包括特征性、線性曲線、準(zhǔn)確度、精確度、重復(fù)性、CCα、CCβ，確保了此方法適用于多種藥物的篩查，以及較寬的濃度檢測(cè)范圍。最初優(yōu)化的提取方法和儀器參數(shù)是在確定篩查方法之后。我們采取在單個(gè)實(shí)驗(yàn)室連續(xù)4天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，通過分析添加空

4、白樣品考察基質(zhì)效應(yīng)、回收率、日內(nèi)重復(fù)和日間重復(fù)，添加濃度分別為1、2、5、10、50和100ppb，每個(gè)濃度重復(fù)5次，計(jì)算平均回收率，標(biāo)準(zhǔn)偏差，CCα，CCβ，LOD and LOQ。
　　不同獸藥不同的物化特性給實(shí)驗(yàn)帶來了非常大的挑戰(zhàn)。飼料樣品的提取和凈化通過分析樣品空白添加而獲得，樣品提取液為包含0.3％ EDTA-Na2的甲醇/乙腈/檸檬酸緩沖液(37.5/37.5/25，v/v/v)pH4.6的混合溶液，凈化采取加入QuE

5、ChERS推薦的PSA進(jìn)行D-SPE。平均回收率為52％-109％，對(duì)應(yīng)的RSD％為2％-20％，超過77％獸藥的回收率在65-109％之間，CCα在0.2-1.3μg/kg之間，CCβ在0.3-1.5μg/kg之間。對(duì)于尿液基質(zhì)而言，采用β芳基硫酯酶酶解的方式孵育3小時(shí)，然后加入包含0.3％ EDTA-Na2的甲醇/乙腈/琥珀酸緩沖液(37.5/37.5/25，v/v/v)pH4.6的混合溶液，凈化同樣采取PSA，平均回收率為50-1

6、33％，對(duì)應(yīng)的RSD％為2％-23％，LOD在0.02-33.3μg/L間，LOQ在0.07-111μg/L之間。血液基質(zhì)的前處理方法和飼料一樣，平均回收率為48％-122％，LOD在0.02-30μg/L間，LOQ在0.07-100μg/L之間.
　　該實(shí)驗(yàn)的目的是為當(dāng)今市面上廣泛使用的飼料產(chǎn)品提供相對(duì)簡(jiǎn)單，重復(fù)性高，靈敏度高的檢測(cè)方法，并兼顧主要的動(dòng)物源性食品（包括奶牛，家禽，豬和主要的動(dòng)物物種）。為所有檢測(cè)的獸藥的定性和定量

7、檢測(cè)提供了可能性，并且說明本方法適合其他復(fù)雜的基質(zhì)。樣品采自當(dāng)?shù)貏?dòng)物飼料安全部門，每一個(gè)陽(yáng)性結(jié)果都通過液相色譜質(zhì)譜進(jìn)行確證。本方法成功的對(duì)一批含有多種獸藥殘留的實(shí)際樣品進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)的57個(gè)實(shí)際樣品中獸藥的殘留為0.18-111μg/kg，使用最多的是磺胺嘧啶類藥物，22個(gè)實(shí)際血漿樣品中獸藥的殘留為0.2-1.9μg/L。
　　目前已有很多針對(duì)動(dòng)物飼料中藥品添加劑檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)。本研究的主要目的是對(duì)商業(yè)現(xiàn)存的動(dòng)物飼料殘留的多種