過量表達AtLEC1和AtMYB118基因改良花生籽粒含油量的研究.pdf

1、本實驗以豐花1號為轉基因受體，利用不同長度種子特異表達啟動子NapinA在花生籽粒中過量表達擬南芥AtLEC1和AtMYB118基因。
　　利用普通PCR和第二代高通量測序技術，對花生轉基因株系進行了初步篩選，得到了2個具p230啟動子驅動的AtLEC1轉基因花生株系2011030801和2011031001;1個由全長NapinA啟動子驅動的AtLEC1轉基因花生株系2011072503;以及2個p270啟動子驅動的AtMYB1

2、18轉基因花生株系2011040603和2011040201。
　　通過QRT-PCR以及Western Blot分析了轉基因花生中AtLEC1和AtMYB118基因在轉錄水平和蛋白水平上的表達。選取果針入土后15d、30d和60d三個時期的種子，利用QRT-PCR的方法對轉基因籽粒中部分脂肪酸生物合成和油脂積累相關的基因以及糖代謝相關基因表達情況進行了分析，結果表明:轉入AtLEC1基因的花生在果針入土15d的種子中各個基因的表

3、達水平都相對較低，與對照豐花1號相比差異不大;60d時，轉基因花生中大多數(shù)測定基因的表達顯著上調，包括AhaccAⅡ、AhBccp1、AhBc4、AhKASⅡ、AhSAD、 AhDGAT1-1、AhDGAT2a、AhO1e2等。糖代謝相關基因AhSuSy的表達量與對照相比在30d時顯著降低，60d時的表達量進一步降低。轉入AtMYB118基因的花生與對照相比較，AhSAD和AhSuSy這兩個基因在果針入土15-30d的種子中的表達顯著上

4、調;轉基因花生脂肪酸合成相關基因AhBccp1、AhBc4和AhKASⅡ分別在30d和60d時轉錄水平顯著提高;而在60d時，除AhO1e3、 AhSAD和AhSuSy表達降低外，其余8個基因的表達均比對照明顯增強。
　　利用近紅外反射光譜、索氏提取法和GC MS對轉基因花生籽粒的含油量、脂肪酸含量和組成進行了分析，發(fā)現(xiàn)不同轉基因花生株系籽粒含油量均明顯提高，最高的比對照提高了20.2％?；ㄉ蚜Ｖ泻孔罡叩?種脂肪酸中，油酸、硬