2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、作為供給人體葉酸需求的主要來(lái)源之一,主要作物如水稻、小麥和玉米的葉酸含量很低。目前在作物葉酸代謝工程中,僅對(duì)大腸桿菌、哺乳動(dòng)物、擬南芥的GTP環(huán)化脫羧酶(GTPCHI)和擬南芥甲叉基苯甲酸合成酶(ADCS)有較深入的研究。本文對(duì)來(lái)源利什曼原蟲(chóng)(Leishmania major)的NADPH依賴(lài)型喋呤還原酶PTR1和大豆的葉酸關(guān)鍵酶GTPCHI進(jìn)行研究,探討它們?cè)谥参?煙草和擬南芥)葉酸生物合成中的作用,取得了以下主要研究結(jié)果:
 

2、  1.構(gòu)建了由CaMV35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)PTR1基因的植物表達(dá)載體pCAMBIA3301-PTR1和PTR1基因與擬南芥蘋(píng)果酸脫氫酶基因(MDH)的線粒體定位序列相融合后的植物表達(dá)載體pCAMBIA3301-MT-PTR1;將上述兩種表達(dá)載體進(jìn)行了煙草的遺傳轉(zhuǎn)化并獲得了轉(zhuǎn)基因植株。
   2.利用轉(zhuǎn)基因植物分析了PTR1對(duì)提高葉酸含量的作用:(1)半定量RT-PCR分析表明,來(lái)源于利什曼原蟲(chóng)的PTR1(定位于胞質(zhì))和MT-PT

3、R1(定位于線粒體)都在煙草植株中得到了表達(dá)。(2)對(duì)PTR1和MT-PTR1轉(zhuǎn)基因當(dāng)代植株的幼嫩葉片的葉酸含量分析表明,定位于胞質(zhì)和線粒體中的PTR1轉(zhuǎn)基因植株的葉酸含量分別為1085.86和802.18 ng/g鮮重,而對(duì)照為522.65 ng/g鮮重。因此,無(wú)論是定位于胞質(zhì)還是線粒體中的PTR1轉(zhuǎn)基因植株,其幼嫩葉片的葉酸含量均顯著高于對(duì)照。
   3.采用RACE技術(shù)從大豆中分離獲得GTPCHI兩個(gè)同源基因的cDNA序列

4、。根據(jù)NCBI網(wǎng)站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)中的大豆EST序列和Phytozome網(wǎng)站(http://www.phytozome.net/)預(yù)測(cè)的大豆GTPCHI cDNA設(shè)計(jì)引物,采用RACE技術(shù),從大豆中分離到2個(gè)完整的cDNA序列,分別為Gm03g21540和Gm08g46160,大小為1380bp和1374bp。經(jīng)比對(duì)發(fā)現(xiàn),Gm03g21540和Gm08g46160的氨基酸序列與番茄GTPCHI

5、結(jié)構(gòu)最為接近,一致性高達(dá)66%和74.9%,相似性高達(dá)59.6%和68.2%;和擬南芥GTPCHI一致性為67%和71.7%、相似性為55.9%和60.2%。
   4.半定量RT-PCR分析表明,大豆GTPCHI同源基因Gm03g21540和Gm08g46160在大豆根、莖和葉中均表達(dá)。其中,Gm03g21540在根中表達(dá)量最高,其次是莖、葉;而Gm08g46160在莖中表達(dá)量最高,根、葉隨后。
   5.構(gòu)建了由Ca

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