氧化應(yīng)激在阿爾茨海默病發(fā)病機(jī)制中的作用及其靶點(diǎn)藥物的開(kāi)發(fā).pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)是一種最常見(jiàn)的神經(jīng)退行性疾病，約占癡呆原因的60％，典型病理特征包括老年斑的形成，神經(jīng)纖維纏結(jié)以及神經(jīng)元死亡。目前研究認(rèn)為β淀粉樣蛋白（betaamyloid，Aβ）誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和線粒體功能障礙在AD發(fā)病中發(fā)揮關(guān)鍵作用。
　　 目的：探討坡壘酚甲（HopeahainolA，HopA）和甘草酸二銨(Diammoniumglycyrrhizinate，DG)對(duì)Aβ1-42誘

2、導(dǎo)神經(jīng)毒性的保護(hù)作用。
　　 方法：(1)第一部分研究利用高效液相色譜法，電鏡以及染色法評(píng)價(jià)HopA對(duì)于Aβ1-42體內(nèi)外聚集能力的影響。ELISA法檢測(cè)HopA處理APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織氧化應(yīng)激水平的變化，電生理學(xué)檢測(cè)HopA對(duì)于APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠海馬長(zhǎng)時(shí)程電位．(longtermpotential，LTP)的影響，行為學(xué)檢測(cè)HopA對(duì)于APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的認(rèn)知以及記憶功能的影響。(2)第二部分研究利用MT

3、T，LDH以及AnnexinV/PI染色判斷DG對(duì)Aβ1-42處理神經(jīng)元細(xì)胞活性的影響，Real-timePCR和Westemblot檢測(cè)DG對(duì)于過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子-1α(peroxisomeproliferator-activatedreceptorgammacoactivator1α，PGC-1α)水平的表達(dá)，并通過(guò)報(bào)告基因技術(shù)探討DG的可能作用位點(diǎn)。同時(shí)行為學(xué)檢測(cè)DG對(duì)于Aβ1-42誘導(dǎo)AD小鼠的認(rèn)知以及記憶功

4、能的影響。
　　 結(jié)果：(1)野生型B6小鼠經(jīng)尾靜脈注射HopA，可以在血清，腦組織以及腦脊液檢測(cè)到HopA的存在。HopA能夠顯著降低APP/PS1小鼠腦皮質(zhì)和海馬區(qū)蛋白，脂質(zhì)以及核酸過(guò)氧化產(chǎn)物3-NT,4-HNE以及8-OHGD的水平，電鏡以及剛果紅染色結(jié)果證實(shí)HopA可以抑制Aβ1-42的纖維化和沉積；電生理結(jié)果顯示HopA明顯改善APP/PS1小鼠突觸功能以及海馬CA1區(qū)的LTP誘導(dǎo)功能；行為學(xué)結(jié)果顯示HopA明顯減少A

5、PP/PS1小鼠找到平臺(tái)的潛伏期以及上臺(tái)前路程，同時(shí)增加其穿過(guò)平臺(tái)的次數(shù)。(2)MTT，LDH以及AnnexinV/PI染色證實(shí)DG能夠顯著提高神經(jīng)元細(xì)胞活力并減少其凋亡水平，DG能夠部分代償Aβ1-42所致的神經(jīng)元線粒體膜電位降低，同時(shí)明顯降低細(xì)胞色素c的釋放以及下游caspase-9和caspase-3的活性。DG能夠顯著上調(diào)PGC-1α的mRNA和蛋白水平，而特異性抑制PGC-1α則部分抑制了其保護(hù)作用。對(duì)PGC-1α的啟動(dòng)子分析