Macelignan對阿爾茨海默病作用機制的實驗研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimet’s disease，簡稱AD)是病因未明的原發(fā)性神經(jīng)退行性疾病(neurodegenerative disease)，可以導致學習和記憶力的下降。Macelignan為從印度尼西亞的植物Myristica fragrans Houtt(Myristicaceae)提取的天然的、無毒副作用的單體成分。傳統(tǒng)上，Myristica fragrans Houtt用于食物佐料和治療齲齒等牙病上。本研究為了探討Ma

2、celignan對阿爾茨海默病的作用機制，采用分子生物學技術(shù)、神經(jīng)行為學和免疫組織化學方法，為天然藥物Macelignan的開發(fā)和應(yīng)用提供了有效的實驗和理論依據(jù)。 本實驗在體外運用Western blot技術(shù)檢測了脂多糖和Macelignan對誘導型一氧化氮合酶(iNOS)、環(huán)氧合酶2(COX-2)、磷酸化的p38、p38、cAMP應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(CREB)、核轉(zhuǎn)錄因子kB p65(NF-kB p65)等蛋白表達的影響，探討其

3、神經(jīng)炎癥病變的細胞內(nèi)信號傳導途徑和Macelignan在谷氨酸的細胞毒性作用下的神經(jīng)保護作用。在體外實驗基礎(chǔ)上，動物第四腦室內(nèi)注入脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)制備老年癡呆動物模型，術(shù)后給予MaceIignan(10mg/kg/日)灌胃，利用Morris水迷宮測試方法檢測了脂多糖和Macelignan對Fischer-344大鼠空間學習記憶的影響，并運用免疫組織化學方法檢測所制備的動物模型的腦病理變化。

4、本研究的主要實驗結(jié)果： 1．各濃度組Macelignan處理神經(jīng)小膠質(zhì)細胞BV2細胞后，利用WST-8試劑盒檢測了其細胞生存率變化，與對照組之間無顯著性差異。 2．倒置顯微鏡觀察結(jié)果表明，用5μg/ml谷氨酸處理的BV2細胞發(fā)生腫脹，細胞間接觸稀疏，增殖減慢，細胞周圍碎片增多。而Macelignan一谷氨酸復合處理組細胞生長旺盛，細胞間結(jié)構(gòu)緊密，與對照組細胞無形態(tài)上的差異。 3．Western blot檢測驗結(jié)果

5、表明，Macelignan可以抑制脂多糖所誘導的iNOS、COX-2、磷酸化的p3 8和CREB等蛋白的表達，LPS組與對照組之間、Macelignan組與LPS組之間有顯著性差異，P<0.05。 4.Western blot檢測結(jié)果表明，LPS與Macelignan對各組之間NF-kBP65表達無顯著性差異。 5.動物神經(jīng)行為學測試結(jié)果，Macelignan可以抑制LPS所導致的逃避潛伏期的延長，第三個循環(huán)開始LPS模

6、型組與對照組之間(P<0.01)、Macelignan組與LPS模型組之間有顯著性差異(P<0.05)。Probe檢測結(jié)果，Macelignan組與LPS組在藏有平臺的1/4象限內(nèi)游泳的時間有顯著性差異(P<0.05)。 6.免疫組織化學檢測結(jié)果，Macelignan可以抑制LPS所誘導的被OX-6染色的活化的小膠質(zhì)細胞。 以上結(jié)果提示： 1.Macelignan在體內(nèi)可以抑制LPS所誘導的動物的空間學習和記憶功

7、能的損害，并抑制了谷氨酸的細胞毒性作用，具有神經(jīng)保護作用。 2.Macelignan在體內(nèi)可以抑制LPS所誘導的小膠質(zhì)細胞的活化，并抑制了BV2細胞在LPS誘導下產(chǎn)生的COX-2的表達，對神經(jīng)退行性疾病具有抗炎作用。 3.Macelignan抑制了BV2細胞在LPS誘導下產(chǎn)生的iNOS的表達，具有很好的抗氧化作用。 4.Macelignan抑制了BV2細胞在LPS誘導下產(chǎn)生的P-p38、CREB的表達。LPS和M