銀杏內(nèi)酯A防治阿爾茨海默病作用及機(jī)制研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)是一種發(fā)生于老年或老年前期的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變疾病，以進(jìn)行性的記憶認(rèn)知障礙、人格改變?yōu)橹饕卣鳎涞湫偷牟±碜兓é?淀粉樣蛋白(Aβ)沉積、Tau蛋白異常過度磷酸化、皮層與海馬組織廣泛神經(jīng)元丟失。隨著全球老齡化的進(jìn)程，其發(fā)病率日益增加，給家庭和社會(huì)帶來了沉重的負(fù)擔(dān)，AD已成為當(dāng)今神經(jīng)科學(xué)及老年醫(yī)學(xué)備受關(guān)注的研究課題，開發(fā)AD治療藥物、探討分子作用機(jī)制迫在眉睫。
　　

2、 目的：
　　 (1)檢測銀杏內(nèi)酯A對(duì)N2a細(xì)胞的毒性以及對(duì)岡田酸(OA)誘導(dǎo)的N2a細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。
　　 (2)探討銀杏內(nèi)酯A對(duì)OA誘導(dǎo)的N2a細(xì)胞Tau蛋白磷酸化水平和PI3K-Akt通路的影響。
　　 (3)研究銀杏內(nèi)酯A對(duì)Aβ誘導(dǎo)的擬AD小鼠腦神經(jīng)元損傷及Tau蛋白異常磷酸化的影響。
　　 方法：
　　 (1)以鼠成神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(N2a)為對(duì)象，MTT法檢測不同劑量的銀杏內(nèi)酯A

3、對(duì)N2a細(xì)胞的毒性以及對(duì)岡田酸(OA)誘導(dǎo)的N2a細(xì)胞死亡的保護(hù)作用；吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)雙染熒光顯微鏡法觀察銀杏內(nèi)酯A對(duì)OA作用下的N2a細(xì)胞的保護(hù)作用；AnnexinV-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測銀杏內(nèi)酯A對(duì)OA誘導(dǎo)的N2a細(xì)胞凋亡的影響。
　　 (2)使用OA干預(yù)N2a細(xì)胞生長，誘導(dǎo)細(xì)胞Tau蛋白過度磷酸化，銀杏內(nèi)酯A藥物處理后，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測N2a細(xì)胞裂解物中總P-Tau的含量，蛋白

4、免疫印跡法(westernblot)檢測p-Tau、p-GSK3β、p-PI3K及p-Akt的表達(dá)。
　　 (3)Aβ1-40腦內(nèi)海馬單側(cè)注射建立擬阿爾茨海默病(AD)動(dòng)物模型，觀察擬AD小鼠行為學(xué)改變；ELISA和westernblot檢測小鼠海馬組織中Tau蛋白磷酸化水平，HE染色法觀察小鼠腦神經(jīng)細(xì)胞病理形態(tài)變化。
　　 結(jié)果：
　　 (1)不同濃度的銀杏內(nèi)酯A(10-4-10-7M)處理細(xì)胞24小時(shí)后，濃度

5、依賴性地阻止了OA誘導(dǎo)的細(xì)胞活力下降；與正常對(duì)照相比，OA模型組細(xì)胞凋亡及壞死數(shù)量明顯升高，不同濃度銀杏內(nèi)酯A作用后的細(xì)胞凋亡和壞死狀況有所改善，且銀杏內(nèi)酯A高劑量組(10-4M)細(xì)胞幾乎恢復(fù)至正常狀態(tài)，表明銀杏內(nèi)酯A對(duì)OA誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有保護(hù)及改善作用。
　　 (2)低劑量銀杏內(nèi)酯A(10-7M)效果不明顯，但隨著銀杏內(nèi)酯A濃度的增加，Tau蛋白異常磷酸化顯著改善，GSK-3βSer9位點(diǎn)的絲氨酸殘基磷酸化也得到抑制，同時(shí)P

6、I3K和Akt的Tyr508和Ser473位點(diǎn)被磷酸化。
　　 (3)與模型組相比，銀杏內(nèi)酯A處理的擬AD小鼠Tau蛋白磷酸化水平有所下降，神經(jīng)元的數(shù)量顯著增多，形態(tài)也比較完整，銀杏內(nèi)酯A可以對(duì)抗由Aβ誘導(dǎo)引起的毒性作用。
　　 結(jié)論：
　　 神經(jīng)細(xì)胞凋亡是AD發(fā)生過程中的一個(gè)重要機(jī)制，研究發(fā)現(xiàn)銀杏內(nèi)酯A對(duì)OA誘導(dǎo)的N2a細(xì)胞凋亡具有一定程度的保護(hù)作用；NFTs是AD患者腦內(nèi)典型的病理特征之一，異常磷酸化Tau蛋