皮質(zhì)醇和殼聚糖對黃顙魚免疫機(jī)能及生長的影響.pdf

1、本論文以黃顙魚為實(shí)驗(yàn)對象，利用皮質(zhì)醇長期混飼投喂的方法，模擬自然發(fā)生的應(yīng)激反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)分別按0mg/kg(對照)、10mg/kg、100mg/kg 3個(gè)濃度進(jìn)行皮質(zhì)醇混飼投喂，日投餌率為3％，在投喂后第1、2、3、4、5、6周進(jìn)行采樣，分別研究了外源皮質(zhì)醇對黃顙魚免疫機(jī)能以及生長的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果對了解應(yīng)激激素皮質(zhì)醇影響黃顙魚抗病力和生長的機(jī)制以及指導(dǎo)黃顙魚健康養(yǎng)殖都具有重要意義。此外，還通過腹腔注射的方法研究了殼聚糖這一免疫刺激劑對黃顙魚

2、非特異性免疫機(jī)能的影響，為今后養(yǎng)殖生產(chǎn)中篩選有效的免疫刺激劑，提高魚體自身免疫力，緩減慢性應(yīng)激造成的免疫力低下提供參考依據(jù)。 通過對黃顙魚血清皮質(zhì)醇水平的測定發(fā)現(xiàn)：各周對照組血清皮質(zhì)醇含量均無顯著性差異，平均值為(8.09±1.83)ng/ml，說明養(yǎng)殖環(huán)境是安靜的，滿足應(yīng)激實(shí)驗(yàn)條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，從投喂第2周開始10mg/kg劑量組和100mg/kg劑量組與對照相比，血清皮質(zhì)醇含量始終顯著升高(P<0.05)。其中投喂第2、5

3、、6周兩個(gè)劑量組與對照組相比，都呈極顯著性差異(P<0.01)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，10mg/kg劑量組黃顙魚血清皮質(zhì)醇濃度上升水平雖不及同期100mg/kg劑量組高，但兩劑量組上升趨勢基本相同，且無顯著差異。結(jié)果表明，采用皮質(zhì)醇混飼投喂的方法可模擬自然發(fā)生的應(yīng)激反應(yīng)，使血清皮質(zhì)醇持續(xù)升高。 在皮質(zhì)醇混飼投喂期間，通過測定黃顙魚脾臟臟器系數(shù)、血清溶菌酶活性、血清補(bǔ)體活性、外周血白細(xì)胞數(shù)量、頭腎吞噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)功能等指標(biāo)，分析了外源皮

4、質(zhì)醇對黃顙魚免疫機(jī)能的影響。結(jié)果顯示： (1)外源皮質(zhì)醇對黃顙魚脾臟造成嚴(yán)重?fù)p傷，從第2周開始皮質(zhì)醇投喂組與對照組相比脾臟臟器系數(shù)顯著下降(P<0.05)。 (2)外源皮質(zhì)醇對頭腎吞噬細(xì)胞的殺菌能力產(chǎn)生顯著抑制作用，從第2周開始靜息頭腎吞噬細(xì)胞還原NBT的能力以及PMA刺激后黃顙魚頭腎吞噬細(xì)胞產(chǎn)生呼吸爆發(fā)的能力顯著下降(P<0.05)。 (3)外源皮質(zhì)醇可促使血清溶菌酶活性顯著升高，從第3周開始皮質(zhì)醇投喂組與對照

5、組相比出現(xiàn)顯著性差異(P<0.05)。 (4)外源皮質(zhì)醇可使血清替代途徑補(bǔ)體活性ACH50值顯著性下降，10mg&g劑量組在投喂第2、5、6周顯著低于對照組(P<0.05)，100mg/kg劑量組從第2周開始一直都極顯著低于同期對照組(P<0.01)。 (5)外源皮質(zhì)醇導(dǎo)致外周血白細(xì)胞總數(shù)和淋巴細(xì)胞百分比從投喂第2周就顯著性下降(P<0.05)；嗜中性粒細(xì)胞百分比增高，與對照組相比10mg/kg劑量組在投喂第2、4周出現(xiàn)

6、顯著性差異(P<0.05)，100mg/kg劑量組在投喂第2、6周出現(xiàn)顯著性差異(P<0.05)；單核細(xì)胞百分比呈上升趨勢，100mg/kg劑量組在投喂第5、6周顯著性高于對照組(P<0.05)。 以上結(jié)果表明，應(yīng)激激素皮質(zhì)醇在黃顙魚體內(nèi)作用1周后，脾臟臟器系數(shù)、頭腎吞噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)功能、血清補(bǔ)體活性以及外周白細(xì)胞數(shù)量都顯著下降，說明皮質(zhì)醇對黃顙魚免疫機(jī)能產(chǎn)生了抑制作用，但血清溶菌酶活性和嗜中性粒細(xì)胞百分比的顯著升高，皮質(zhì)醇對免

7、疫機(jī)能影響的機(jī)制是非常復(fù)雜的，不能僅從某一指標(biāo)的升高或降低就定論皮質(zhì)醇對魚體免疫機(jī)能是促進(jìn)還是抑制。 在研究皮質(zhì)醇混飼投喂對黃顙魚生長影響的實(shí)驗(yàn)中，對采樣各周的黃顙魚體重、血糖、肝糖原進(jìn)行了測定，并對混飼投喂第6周的黃顙魚腸道進(jìn)行了組織學(xué)切片觀察。結(jié)果顯示： (1)外源皮質(zhì)醇使黃顙魚體重下降。從第2周開始10mg/kg劑量組和100mg/kg劑量組黃顙魚體重始終低于同期對照組，且10mg/kg劑量組在第3周、100mg/

8、kg劑量組在第6周體重顯著低于同期對照組(P<0.05)。 (2)外源皮質(zhì)醇使黃顙魚血糖從第1周就顯著升高(P<0.05)；而使肝糖原含量下降，整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間皮質(zhì)醇投喂組肝糖原含量一直低于對照組，且在投喂第2、6周有顯著性差異(P<0.05)。 (3)組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，外源皮質(zhì)醇可使黃顙魚腸道粘膜皺襞減少、上皮細(xì)胞脫落。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，外源皮質(zhì)醇可通過損害腸道粘膜皺襞、促進(jìn)肝糖原分解和糖異生作用，使黃顙魚初期生長受阻，后期停止

9、生長，體重下降。 在研究殼聚糖對黃顙魚非特異性免疫機(jī)能影響的實(shí)驗(yàn)中，按2mg/尾的劑量腹腔注射殼聚糖，注射后第2、4、6、10d采樣，對頭腎NBT陽性細(xì)胞數(shù)量、頭腎吞噬細(xì)胞吞噬百分比和吞噬指數(shù)、血清補(bǔ)體活性以及血清溶菌酶活性、外周血各類白細(xì)胞百分比進(jìn)行了測定，研究發(fā)現(xiàn)： (1)殼聚糖可提高黃顙魚頭腎吞噬細(xì)胞的吞噬、殺菌活性，但對頭腎吞噬細(xì)胞趨化性無顯著影響。頭腎吞噬細(xì)胞的吞噬百分比和吞噬指數(shù)在注射第4、6d出現(xiàn)極顯著增高