應用人臍帶間充質干細胞修復牙移植術后牙周組織損傷的實驗研究.pdf

1、自體牙移植術是一種將自體牙從原位置移植到受區(qū)牙槽窩,用來治療牙列缺損的一種外科治療方法。有學者報道牙移植術的手術成功率超過了90％,提示該技術作為治療牙列缺損的外科手段之一,具有廣闊的前景和應用價值。
　　雖然牙移植術有著較高的手術成功率,仍有許多因素影響移植牙的存活時間,如移植牙的離體時間、移植牙牙根與受區(qū)牙槽骨的外形、患者年齡等。所有因素都可以歸結為“牙周組織的狀況和愈合程度”。因此,改善牙周組織的狀況,提高其愈合能力是提高牙

2、移植手術成功率的主要方法之一。
　　牙周膜干細胞是存在于牙周組織中具有多向分化潛能、在牙周組織損傷修復中起重要作用的一種成體干細胞。通過調節(jié)牙周膜干細胞的細胞活性,可以增強牙移植術后牙周組織的修復能力,提高牙移植術的手術成功率。然而牙周膜干細胞的細胞來源是一個主要問題,需要提前安排手術取材,才能得到個體化的牙周膜干細胞。骨髓間充質干細胞和牙周膜干細胞類似,也是一種來源于中胚層的成體干細胞,具有多向分化的能力,可以用作牙周組織損傷修

3、復的種子細胞,提高牙移植術的手術成功率。但是骨髓間充質干細胞的取材也是“有創(chuàng)”的,并不能適用于所有病例?！澳殠чg充質干細胞”或許是最佳選擇。來源于臍帶組織的臍帶間充質干細胞具有細胞來源豐富、無創(chuàng)取材、易于獲取、無論理學限制、低免疫原性等特性,很適合作為一種新型種子細胞,用于牙周組織損傷的修復,提高牙移植術的手術成功率。
　　本研究擬通過體外實驗,研究并細化了臍帶間充質干細胞的成骨特性;通過體內實驗,模擬牙周組織愈合情況,研究臍帶間

4、充質干細胞是否適合用于提高牙移植術的手術成功率。
　　實驗一人臍帶間充質干細胞的原代培養(yǎng)及鑒定
　　目的:通過原代培養(yǎng)得到本研究所需的臍帶間充質干細胞,并對細胞性質進行鑒定。
　　方法:通過酶消化法進行臍帶間充質干細胞的原代培養(yǎng);通過流式細胞技術對獲得細胞的表面CD分子進行鑒定,包括CD29、CD146、CD105、CD34、CD44、CD45。
　　結果:通過酶消化法可以獲得大量的人臍帶間充質干細胞,培養(yǎng)方法簡

5、單易行,結果穩(wěn)定;流式鑒定結果顯示人臍帶間充質干細胞與其他間充質干細胞類似,表達干細胞表面標記物CD29(99.8%)、CD44(99.9%)、CD146(92.8)、CD105(98.9%),但不表達造血譜系標記物CD34(1.52%)、CD45(1.76%)。
　　結論:通過酶消化法可以順利的得到人臍帶間充質干細胞,該細胞高表達間充質干細胞表面標記物,可以用于后期的實驗研究。
　　實驗二人臍帶間充質干細胞成骨分化的體外實

6、驗研究
　　目的:研究人臍帶間充質干細胞的成骨分化及其在成骨誘導過程中干細胞和成骨相關標記物的變化情況。
　　方法:通過茜素紅染色、Van Kossa染色和細胞免疫熒光技術對成骨誘導后的細胞進行鑒定;在成骨誘導過程中設立時間點(0d、7d、14d、21d),通過流式細胞技術對干細胞標記物CD146和SOX2進行檢測;對堿性磷酸酶、CD146/SOX2(mRNA水平)、骨橋蛋白/骨涎蛋白/Runx2(mRNA水平和蛋白水平)進

7、行檢測。
　　結果:對細胞進行成骨誘導21天后茜素紅、Van Kossa染色陽性,免疫熒光染色檢測到胞漿內大量表達骨橋蛋白和骨涎蛋白;干細胞標記物CD146和SOX2在誘導過程中呈下降趨勢;堿性磷酸酶活性在第7天時即表現(xiàn)出具有統(tǒng)計學差異的升高,骨橋蛋白/骨涎蛋白(mRNA水平和蛋白水平)在成骨誘導過程中呈上升趨勢,7天或14天既有顯著性差異;Runx2(蛋白水平)在第7天時達到峰值,隨后下降。
　　結論:人臍帶間充質干細胞的

8、成骨分化過程是一個連續(xù)的過程;體外誘導7d后成骨分化進行已經全面啟動;經過誘導的人臍帶間充質干細胞比未誘導的細胞更適合用于骨缺損修復。
　　實驗三應用人臍帶間充質干細胞模擬牙移植術后牙周組織再生的體內實驗研究
　　目的:通過體內實驗模擬牙移植術后牙周組織的愈合情況。
　　方法:將7d預誘導的干細胞做為“實驗組”,無誘導的干細胞為“對照組”。牙本質、生物蛋白膠和人臍帶間充質干細胞混合制作成一種“植入復合體”,通過植入免疫