葎草黃酮類(lèi)成分及藥理作用的研究.pdf

1、前言:葎草始載于《名醫(yī)別錄》,藥用歷史悠久,在民間廣泛應(yīng)用。歷代本草如《唐本草》、《開(kāi)寶本草》、《本草綱目》等均有記載。當(dāng)代很多醫(yī)藥書(shū)籍亦有收錄。但國(guó)內(nèi)外對(duì)葎草的化學(xué)成分、藥理作用等未見(jiàn)深入的研究報(bào)道。本試驗(yàn)對(duì)葎草的化學(xué)成分進(jìn)行了提取、分離和鑒定工作,得到葎草中主要的黃酮類(lèi)成分為木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(LGL)、大波斯菊苷(AGL)和牡荊素(VIT)三種;對(duì)不同季節(jié)和不同部位葎草中LGL和AGL的含量進(jìn)行了測(cè)定,為葎草的采收

2、季節(jié)和藥用部位提供了理論依據(jù);對(duì)葎草總黃酮(HSTF)和AGL在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行了測(cè)定,為其制備成適當(dāng)?shù)膭┬投鴳?yīng)用于臨床奠定了理論基礎(chǔ);對(duì)HSTF、LGL和AGL的抑瘤作用進(jìn)行了初步研究,發(fā)現(xiàn)LGL和HSTF對(duì)HepG2細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制作用;通過(guò)小鼠肺水清除率試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)HSTF、LGL和AGL三種成分均能促進(jìn)肺泡上皮細(xì)胞鈉通道的開(kāi)放而達(dá)到利水作用,為葎草利水消腫功效的現(xiàn)代臨床應(yīng)用打下堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。
　　 目的:通過(guò)

3、對(duì)葎草的研究,明確葎草中所含的黃酮類(lèi)成分;明確葎草的最佳采集季節(jié)及藥用部位;明確葎草中HSTF和AGL在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征;明確葎草中HSTF、LGL和AGL的相關(guān)藥理作用。為葎草的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和應(yīng)用打下堅(jiān)實(shí)理論基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 采用大孔吸附樹(shù)脂技術(shù)、硅膠柱層析技術(shù)及制備液相技術(shù)分離純化葎草的化學(xué)成分。
　　 采用高效液相色譜法對(duì)不同季節(jié)及不同部位葎草中LGL和AGL的含量進(jìn)行測(cè)定。
　　

4、采用高效液相色譜法對(duì)HSTF和AGL在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行測(cè)定。
　　 采用細(xì)胞培養(yǎng)和臺(tái)盼藍(lán)染色法探討了HSTF、LGL和AGL對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的抑制作用。
　　 采用小鼠肺水清除率方法探討了HSTF、LGL和AGL的利水作用及其作用機(jī)制。
　　 結(jié)果:
　　 葎草化學(xué)成分分離鑒定結(jié)果通過(guò)紫外光譜,紅外光譜,核磁共振譜等確定所分離的4種有機(jī)單體成分分別為:LGL、AGL、VIT和尿嘧啶。同時(shí),

5、初步確定一種硝酸鹽類(lèi)無(wú)機(jī)物質(zhì)為硝酸鉀。
　　 葎草化學(xué)成分含量測(cè)定結(jié)果通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定可知:葎草中LGL和AGL含量在6～8月份較高。其中LGL含量在7月份最高,AGL含量在6月份最高。不同部位葎草中LGL和AGL含量由高到低依次為:葉＞莖＞葉柄＞根。
　　 葎草化學(xué)成分藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定結(jié)果對(duì)SD大鼠單次靜脈給予葎草總黃酮(HSTF)注射液,于給藥后不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定血藥濃度。經(jīng)藥代動(dòng)力學(xué)軟件處理得到不同劑量LGL的

6、清除率(C1)從6.25～7.81L/h/kg,半衰期(t1/2)從1.43～2.43 h,表觀分布容積(Vc)從15.99～21.89 L/kg;AGL的清除率(C1)從10.44～15.84 L/h/kg,半衰期(t1/2)從1.56～3.97 h,表觀分布容積(Vc)從35.59～65.17 L/kg。對(duì)SD大鼠單次靜脈給予AGL注射液,于給藥后不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定血藥濃度。經(jīng)藥代動(dòng)力學(xué)軟件處理得到不同劑量AGL的清除率(C1)從11.

7、38～15.83 L/h/kg,半衰期(t1/2)從1.36～2.03 h,表觀分布容積(Vc)從26.01～44.95 L/kg。
　　 葎草化學(xué)成分抑瘤試驗(yàn)結(jié)果采用細(xì)胞培養(yǎng)和臺(tái)盼藍(lán)染色法測(cè)定葎草化學(xué)成分的抑瘤作用,當(dāng)HSTF、LGL和AGL的濃度由6.25～100μM時(shí),HepG2細(xì)胞活度分別為91.2％～5.5％,71.2％～4.8％,96.4％～78.8％。
　　 葎草化學(xué)成分利水作用試驗(yàn)結(jié)果肺水清除率試驗(yàn)結(jié)果顯

8、示:5％BSA對(duì)照組AFC為29.8％;阿米洛利組AFC為20.8％(P＜0.05);特布他林組AFC為42.0％(P＜0.05);LGL組AFC為34.3％;LGL+阿米洛利組AFC為22.8％(P＜0.05);AGL組AFC為35.4％;AGL+阿米洛利組AFC為21.0％(P＜0.05);總黃酮組AFC為38.9％(P＜0.05);總黃酮+阿米洛利組AFC為26.7％(P＜0.05)。
　　 結(jié)論與討論:
　　 葎

9、草中所含有的黃酮類(lèi)成分主要為L(zhǎng)GL、AGL和VIT,其中VIT的含量較低。
　　 葎草以黃酮類(lèi)成分為物質(zhì)基礎(chǔ)的臨床應(yīng)用中,采集季節(jié)應(yīng)該在6～8月份,葎草葉應(yīng)該是主要藥用部位。
　　 建立的高效液相色譜法測(cè)定葎草中化學(xué)成分藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法簡(jiǎn)便易行,可以用于測(cè)定HSTF和AGL在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。HSTF和AGL適合制備成相關(guān)的劑型在臨床上應(yīng)用。
　　 HepG2細(xì)胞活性抑制試驗(yàn)結(jié)果顯示:HSTF和LGL

10、對(duì)HepG2細(xì)胞活性抑制作用明顯,并且呈劑量依賴(lài)關(guān)系,隨著藥物濃度的增加細(xì)胞活性降低。AGL對(duì)HepG2細(xì)胞活性的作用顯著低于LGL和HSTF。文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)黃酮類(lèi)成分對(duì)于抗腫瘤細(xì)胞的增殖作用,其B環(huán)上C3,C4位上的兩個(gè)鄰位-OH對(duì)于抑制酶的活性是必需的。C2和C3之間的共軛雙鍵使B環(huán)和C環(huán)在同一平面,有利于接近激酶底物結(jié)合位點(diǎn),這兩種結(jié)構(gòu)對(duì)于黃酮類(lèi)成分抗細(xì)胞增殖的活性至關(guān)重要,這與本試驗(yàn)結(jié)果相吻合。同時(shí)也能夠解釋LGL和AGL兩個(gè)黃酮類(lèi)化

11、合物雖然只相差了一個(gè)-OH,但其藥理作用卻相差懸殊的原因。
　　 肺水清除率(AFC)試驗(yàn)結(jié)果顯示:阿米洛利作為上皮細(xì)胞鈉通道的阻斷劑,顯著降低正常組小鼠肺水清除率約30.2％。這說(shuō)明阿米洛利對(duì)鈉通道的阻斷作用使肺泡對(duì)水份的吸收作用受到抑制。而特布他林作為鈉通道的開(kāi)放劑,能夠增加正常組小鼠的肺水清除率約40.9％。說(shuō)明特布他林具有促進(jìn)鈉通道開(kāi)放的作用,使肺泡上皮鈉通道對(duì)水的通透性增強(qiáng)。HSTF組、LGL組和AGL組的肺水清除率與