黃葵黃酮類(lèi)成分的吸收與代謝研究.pdf

1、黃葵又名黃蜀葵花(Abelmoschusmanihot(L.)Medic)是錦葵科秋葵屬中草藥,該藥具有抗炎、抑菌、抗凝血、抗氧化、利尿、對(duì)心肌和腦缺血損傷的保護(hù)作用,對(duì)腎細(xì)胞膜的保護(hù)作用等,在臨床上常被用來(lái)治療慢性腎炎、糖尿病腎病、口腔潰瘍和燒傷等疾病?，F(xiàn)有對(duì)黃葵化學(xué)成分和藥理作用的研究,表明其中主要的化學(xué)成分是金絲桃苷、異槲皮苷、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷、楊梅素、棉皮素、槲皮素、槲皮素-3'-O-葡萄糖苷等為主的黃酮類(lèi)成分。第Ⅲ

2、類(lèi)新藥黃葵膠囊,不久前已獲得國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局(SFDA)的審批,主要是由黃蜀葵花的醇提取物組成,廣泛用于治療慢性腎小球腎炎。截至目前,黃葵膠囊已成為我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥在治療慢性腎炎方面發(fā)揮重要作用的常用中藥。
　　 隨著黃葵在臨床上的廣泛應(yīng)用,對(duì)其體內(nèi)動(dòng)態(tài)過(guò)程的解析顯的相當(dāng)重要,為此,本論文通過(guò)建立大鼠在體腸灌流模型、腸道菌群體外代謝模型;采用微透析采樣技術(shù)與UPLC-O-TOF-MS聯(lián)用分析技術(shù)、運(yùn)用UPLC-Q-TOF-M

3、S中MSEE數(shù)據(jù)采集方式,以質(zhì)量丟失濾過(guò)(MDF)處理為基礎(chǔ)快速篩選和鑒定代謝物的方法,試圖從中獲取大量的生物信息,以明確其在體內(nèi)吸收和代謝過(guò)程的特征,闡明黃葵黃酮類(lèi)成分的作用機(jī)制與過(guò)程。對(duì)于指導(dǎo)新藥設(shè)計(jì),提高藥物療效和安全性,科學(xué)的評(píng)價(jià)黃葵黃酮類(lèi)成分的藥用價(jià)值奠定了基礎(chǔ)。
　　 首先,本論文綜述了黃葵化學(xué)成分、相關(guān)藥理學(xué)研究、常規(guī)的吸收模型、黃酮類(lèi)成分的吸收代謝研究、微透析采樣技術(shù),為黃葵黃酮類(lèi)成分的吸收和代謝過(guò)程的研究奠定了

4、基礎(chǔ)。
　　 為了研究黃葵黃酮類(lèi)成分的腸吸收機(jī)制,進(jìn)行了黃葵醇提物不同濃度、不同腸段大鼠在體腸吸收的研究。采用HPLC法測(cè)定循環(huán)液中藥物濃度,分析了黃葵6種黃酮類(lèi)成分的腸吸收,開(kāi)展了P-gp抑制劑、吸收促進(jìn)劑對(duì)黃葵黃酮類(lèi)成分吸收影響的研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:黃葵各黃酮成分在不同濃度下,Ka值沒(méi)有明顯差異(P＞0.05),吸收呈一級(jí)動(dòng)力學(xué)過(guò)程,提示為被動(dòng)擴(kuò)散吸收;各黃酮成分之問(wèn)的吸收有差異性,苷類(lèi)成分的Ka值小于苷元類(lèi)成分;各成分在不

5、同腸段均有吸收,金絲桃苷和楊梅素的最佳吸收部位分別為空腸和十二指腸;P-gp抑制劑維拉帕米可促進(jìn)異槲皮苷、金絲桃苷、楊梅素和槲皮素3'-O-葡萄糖苷的吸收。吸收促進(jìn)劑牛膽鹽可顯著增加異槲皮苷、棉皮素-8-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-3'-葡萄糖苷、楊梅素和金絲桃苷的吸收,SDS可顯著增加異槲皮苷、棉皮素-8-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-3'-葡萄糖苷和金絲桃苷的吸收,卵磷脂、EDTA對(duì)黃葵各黃酮成分無(wú)顯著的促吸收效果(P＞0.05)。有些吸收促進(jìn)劑

6、如卵磷脂、EDTA,甚至減少各組分的吸收。上述吸收促進(jìn)劑對(duì)槲皮素均無(wú)顯著差異,提示槲皮素的吸收可能與上述幾種促進(jìn)吸收劑所介導(dǎo)的吸收機(jī)制無(wú)關(guān)。
　　 建立了腸道厭氧菌群體外代謝研究模型,對(duì)黃葵黃酮類(lèi)成分的腸道菌群代謝進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在人腸道菌孵育液中發(fā)現(xiàn)以下成分:金絲桃苷、異槲皮苷、棉皮素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、楊梅素、槲皮素、金絲桃苷羥基化產(chǎn)物、2個(gè)金絲桃苷乙?；a(chǎn)物、槲皮素雙羥基化產(chǎn)物、槲皮素甲基化結(jié)合產(chǎn)物、

7、槲皮素脫氧、楊梅素的乙?；a(chǎn)物。在大鼠腸道菌孵育液中發(fā)現(xiàn)以下成分:金絲桃苷、異槲皮苷、棉皮素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、楊梅素、槲皮素-3'-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素、2個(gè)金絲桃苷羥基化產(chǎn)物、2個(gè)金絲桃苷乙?；a(chǎn)物、槲皮素甲基化結(jié)合產(chǎn)物、槲皮素脫氧、楊梅素的乙酰化產(chǎn)物。另外經(jīng)研究表明主要的黃酮苷類(lèi)成分均水解為相應(yīng)的苷元,揭示黃葵黃酮類(lèi)成分在腸道菌群中的代謝途徑主要是以水解反應(yīng)和羥基化等Ⅰ相代謝反應(yīng)為主。
　　 通過(guò)灌胃給

8、藥,首先考察了黃葵黃酮類(lèi)成分在大鼠體內(nèi)的分布情況,試圖尋找黃葵黃酮類(lèi)成分在體內(nèi)的靶向器官。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:黃葵黃酮類(lèi)各組分在大鼠體內(nèi)的分布主要集中在腎、肝中,這與黃葵廣泛的應(yīng)用于腎病的治療是相符的。通過(guò)微透析取樣技術(shù)與UPLC-Q-TOF/MS聯(lián)用分析黃葵黃酮類(lèi)成分在大鼠血液和靶向器官腎臟中的代謝情況,試圖尋找其存在的潛在活性成分。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在大鼠血液透析液中發(fā)現(xiàn)了:金絲桃苷、異槲皮苷、棉皮素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、楊梅素、槲

9、皮素-3'-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素、槲皮素單葡萄糖醛酸苷-1和槲皮素單葡萄糖醛酸苷-2。在大鼠腎透析液中發(fā)現(xiàn)了:金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素單葡萄糖醛酸苷-2。
　　 研究表明黃蜀葵的醇提取物能夠保護(hù)小鼠避免受戊四唑引起的驚厥反應(yīng)并降低小鼠的死亡率;可減少小鼠游泳時(shí)不動(dòng)時(shí)間,此外,通過(guò)超高效液相質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-MS)測(cè)定大鼠腦內(nèi)黃蜀葵醇提物的潛在活性成分,結(jié)果表明其潛在活性成分主要是異槲皮苷,金絲桃苷,槲皮素-3'-

10、O葡萄糖苷,槲皮素及三種代謝物,這些成分可能是黃蜀葵醇提物中的活性成分,并具有潛在的抗驚厥及抗抑郁作用。
　　 采用UPLC-Q-TOF-MS聯(lián)用技術(shù),通過(guò)MetabolynxTM軟件中的MSE數(shù)據(jù)采集方式,以質(zhì)量丟失濾過(guò)(MDF)處理為基礎(chǔ),研究了大鼠靜脈注射金絲桃苷后金絲桃苷在血漿、尿液、膽汁中的代謝,金絲桃苷總共被檢測(cè)到原型及其12個(gè)Ⅱ相代謝產(chǎn)物,結(jié)果表明甲基化、硫酸化、葡萄糖醛酸化是金絲桃苷在體內(nèi)的主要代謝途徑。在血漿中

11、發(fā)現(xiàn)了:金絲桃苷的原型、3'-O-甲基-金絲桃苷;在尿液中發(fā)現(xiàn)了:金絲桃苷的原型、3'-O-甲基-金絲桃苷、4'-O-甲基-金絲桃苷、2個(gè)金絲桃苷的硫酸化結(jié)合產(chǎn)物、金絲桃苷的甲基化葡糖醛酸代謝物、金絲桃苷的硫酸化葡糖醛酸結(jié)合產(chǎn)物、2個(gè)金絲桃苷的甲基化硫酸結(jié)合產(chǎn)物。在膽汁中發(fā)現(xiàn)了:3'-O-甲基-金絲桃苷、4'-O-甲基-金絲桃苷、金絲桃苷的硫酸化結(jié)合產(chǎn)物、3個(gè)金絲桃苷的甲基化葡糖醛酸代謝物、2個(gè)金絲桃苷的甲基化硫酸結(jié)合產(chǎn)物、2個(gè)金絲桃苷