甘草藥渣中黃酮類(lèi)活性成分研究.pdf

1、中藥甘草為豆科植物烏拉爾甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草Glycyrrhizainflata Bat.和光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的根及根莖，富含三萜皂苷和黃酮類(lèi)成分，為最常用的大宗藥材之一，臨床上常用于治療胃潰瘍、肝炎等疾病。目前，甘草在工業(yè)化生產(chǎn)中大多采用水煎煮提取甘草酸，提取后產(chǎn)生的藥渣通常作為工業(yè)廢料棄去。然而，甘草藥渣中仍存在大量的脂溶性黃酮類(lèi)物質(zhì)，其效應(yīng)廣泛，具有

2、抗氧化、抑菌、抗腫瘤、神經(jīng)保護(hù)等作用。值得關(guān)注的是，甘草黃酮類(lèi)型復(fù)雜，不同來(lái)源甘草藥渣中黃酮類(lèi)化合物存在較大的差異，從構(gòu)效關(guān)系的基本原理推測(cè)，其活性也不盡相同。為此，本文以藥典收載的甘草水提取后藥渣為研究對(duì)象，對(duì)其中含有的黃酮類(lèi)成分及其裂解規(guī)律和抗氧化活性進(jìn)行了比較系統(tǒng)的研究。所做工作如下:
　　1.甘草藥渣化學(xué)成分的分離和結(jié)構(gòu)鑒定:采用硅膠、C18中壓柱色譜等技術(shù)從甘草藥渣中分離獲得了14個(gè)單體化合物，通過(guò)UV、MS、1D NM

3、R、2D NMR等光譜解析方法，鑒定了13個(gè)黃酮類(lèi)成分和1個(gè)香豆素類(lèi)成分的結(jié)構(gòu)，分別鑒定為licoisoflavone B(HT-1)、glabrone(HT-2)、semilicoisoflavone B(HT-3)、licoisoflavone A(HT-4)、licochalcone A(HT-5)、formononetin(HT-6)、liquiritigenin(HT-7)、isoliquiritigenin(HT-8)、li

4、coflavone(HT-9)、licoflavone C(HT-10)、liquiritin(HT-11)、kumatakenin A(HT-12)、 licoricone(HT-13)和neoglycyrol(HT-14)。
　　2.甘草黃酮類(lèi)成分HPLC-PDA-TOF-MS(+)的裂解規(guī)律及藥渣中成分鑒定研究:在正離子模式下，采用HPLC-PDA-TOF/MS技術(shù)開(kāi)展了甘草黃酮類(lèi)成分裂解規(guī)律及結(jié)構(gòu)鑒定研究，總結(jié)了紫外吸收光

5、譜數(shù)據(jù)及相應(yīng)的裂解規(guī)律:紫外特征吸收光譜可預(yù)測(cè)黃酮的骨架類(lèi)型，再結(jié)合特征裂解碎片，可進(jìn)一步確定其骨架結(jié)構(gòu)類(lèi)型，如特征碎片離子0,2B+，0,3B+，2,3B+可分別預(yù)測(cè)黃酮、異黃酮、異黃烷的存在。此外，取代基部分的特征丟失，如18Da（羥基）、32Da（甲氧基）、42Da（偕二甲基色烯結(jié)構(gòu)）、56Da（異戊二烯基）等，可以預(yù)測(cè)黃酮類(lèi)化合物結(jié)構(gòu)中取代基的種類(lèi)和數(shù)目。在以上研究基礎(chǔ)上，針對(duì)不同來(lái)源甘草藥渣進(jìn)行了成分鑒定研究，推測(cè)或鑒定了藥渣

6、中的39個(gè)化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)，包括10個(gè)黃酮、14個(gè)異黃酮、5個(gè)二氫黃酮、6個(gè)查爾酮、2個(gè)異黃烷和2個(gè)香豆素。
　　3.甘草藥渣黃酮類(lèi)成分的活性評(píng)價(jià)及其構(gòu)效關(guān)系探討:采用DPPH自由基清除試驗(yàn)及酪氨酸酶抑制試驗(yàn)，研究了甘草藥渣中黃酮類(lèi)成分的抗氧化活性，并對(duì)其構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行了初步的探討。結(jié)果表明，從甘草藥渣中分離獲得的黃酮類(lèi)單體化合物，由于骨架類(lèi)型、取代基的種類(lèi)、數(shù)目和位置以及空間位阻不同，抗氧化活性也不盡相同，其中，DPPH自由基清除活