夏枯草黃酮類成分提取與分離純化技術(shù)研究.pdf

1、提取、分離純化中藥的有效成分是進(jìn)行中藥研究的前提,也是中藥現(xiàn)代化研究的關(guān)鍵問(wèn)題所在。傳統(tǒng)的提取分離技術(shù)如:煎煮法、浸漬法、滲漉法和柱色譜,存在著有效成分提取率不高、雜質(zhì)多、能耗高等缺點(diǎn),不僅容易污染環(huán)境,而且所獲得的產(chǎn)品往往存在傳統(tǒng)中成藥“粗、大、黑”的缺點(diǎn),療效也不穩(wěn)定。因此,發(fā)展新型提取及分離純化技術(shù),建立中藥高效、快速、能耗低的提取及分離的技術(shù)體系,為開展藥理藥效等研究,解決中藥質(zhì)量和療效等關(guān)鍵問(wèn)題提供技術(shù)支撐。鑒于此,本論文以夏

2、枯草為研究對(duì)象,通過(guò)分析超聲、微波、超臨界等提取方法對(duì)夏枯草黃酮類成分得率的影響,并應(yīng)用高速逆流色譜分離技術(shù)進(jìn)行分離,從而建立夏枯草有效成分的快速提取分離技術(shù)體系,同時(shí)為其他中藥資源進(jìn)行類似研究提供參考。主要研究結(jié)果如下:1.采用超聲波提取技術(shù)建立了夏枯草黃酮類成分的提取技術(shù)體系。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn),分析了乙醇濃度、超聲時(shí)間、提取次數(shù)、料液比四個(gè)因素對(duì)黃酮得率的影響,單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在其他條件一樣的情況下,50％乙醇濃度、20min的提

3、取時(shí)間、1:50的料液比以及提取次數(shù)5次所獲得黃酮得率最高;在此基礎(chǔ)上,通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步優(yōu)化,得出超聲波提取夏枯草黃酮的最優(yōu)工藝即:以乙醇濃度60％為提取溶劑,在料液比1:40條件下提取25min提取次數(shù)4次。對(duì)優(yōu)化工藝條件進(jìn)行了三次平行的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明在此條件下黃酮得率分別4.18％,4.10％,4.21％,平均得率為4.16％,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.36％。為了考察這些方法與傳統(tǒng)方法的提取效率,最后在優(yōu)化的條件下與

4、傳統(tǒng)的回流提取進(jìn)行了比較,結(jié)果表明超聲波提取黃酮得率是回流提取法的3.68倍。
　　 2.應(yīng)用微波提取技術(shù)建立了夏枯草黃酮類成分的提取工藝。在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,探討了乙醇濃度、微波作用時(shí)間、微波功率、料液比對(duì)黃酮得率的影響;單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在其他條件一樣的情況下,50％乙醇濃度、提取時(shí)間8min、料液比1:50和300W的微波功率所獲得黃酮得率最高:然后運(yùn)用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)結(jié)果進(jìn)一步優(yōu)化,確定了微波提取夏枯草黃酮的優(yōu)化工藝條

5、件即以70％乙醇做為提取劑,料液比為1:40,在微波功率200W條件下提取10min。在此工藝條件下進(jìn)行了三次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),結(jié)果三次得率分別為8.61％,8.73％,8.69％平均得率為8.67％,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.70％,差異較小,說(shuō)明工藝可行。為了考察這些方法與傳統(tǒng)方法的提取效率,還與傳統(tǒng)回流提取法以及超聲波法進(jìn)行了比較,結(jié)果表明微波法分別是超聲波法和回流法的2.08倍、7.67倍。
　　 3.應(yīng)用超臨界CO2流體萃取技術(shù)

6、建立了夏枯草黃酮類成分的提取工藝技術(shù)體系。首先研究了溫度、壓力、時(shí)間、90％乙醇夾帶劑用量對(duì)黃酮得率的影響;單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在其他條件一樣的情況下,萃取溫度50℃、萃取時(shí)間3h、萃取壓力40Mpa、夾帶劑用量4.5ml/g所獲得黃酮得率最高:然后采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果,得到超臨界法提取夏枯草黃酮的優(yōu)化工藝條件,在此工藝條件下進(jìn)行了三次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),并與傳統(tǒng)提取方法、微波法、超聲波法做了比較。研究結(jié)果表明:超臨界流體萃取法提取夏枯草黃酮

7、的優(yōu)化工藝條件為:萃取溫度40℃,萃取壓力40Mea,萃取時(shí)間2.5h,夾帶劑用量4ml/g。為了考察這些方法與傳統(tǒng)方法的提取效率,還在優(yōu)化條件下與傳統(tǒng)提取方法做了比較,研究結(jié)果還表明:超聲波和微波法提取效果優(yōu)于超臨界流體萃取法,分別是它的1.07倍、2.23倍,但超臨界提取效果優(yōu)于傳統(tǒng)的回流提取法,是它的的3.43倍。
　　 4.應(yīng)用高速逆流色譜技術(shù)建立了夏枯草黃酮類成分的分離技術(shù)體系。首先考察了溫度、流速、轉(zhuǎn)速對(duì)峰的分離度和

8、固定相保留率的影響;然后,根據(jù)分離效果初步篩選了氯仿-甲醇-水(6:8:4,v/v)做為夏枯草黃酮類成分分離洗脫體系;在此基礎(chǔ)上,考察了不同的進(jìn)樣量以及不同的洗脫方式對(duì)分離效果的影響,優(yōu)化了分離的溶劑體系;優(yōu)化后的分離體系:以氯仿-甲醇-水(6:8:4,v/v)做為初始洗脫體系上相做固定相,下相做流動(dòng)相,流速2.0mL/min;主機(jī)轉(zhuǎn)速800rpm;工作溫度30℃;檢測(cè)波長(zhǎng);254nm;進(jìn)樣量80mg進(jìn)行洗脫,第170,min換用氯仿-