柑桔皮中黃酮類物質(zhì)的提取、分離及純化研究.pdf

1、柑桔類水果是全世界產(chǎn)量最大的水果之一、也是一種重要的經(jīng)濟植物，皮渣作為其主要副產(chǎn)物占柑桔總量的20％～40％，具有較大的利用價值；據(jù)研究，柑桔皮中含有豐富的生物活性物質(zhì)一黃酮類化合物。黃酮類藥物具有抗腦缺血作用、抗心肌缺血作用、抗心律失常作用、鎮(zhèn)痛作用、保肝護肝作用、對消化性潰瘍的保護作用、抗病毒、抗腫瘤作用等。此外，還有大量研究表明黃酮類天然產(chǎn)物有效成分有降壓、降血脂、抑制血小板聚集等多種藥理作用，說明天然產(chǎn)物黃酮類有效成分確有多種生

2、物學活性。為此，受到各國政府和醫(yī)藥、食品等行業(yè)的高度重視和關注。而黃酮類有效成分的提取又是其研發(fā)和應用的關鍵技術和階段之一，但到目前為止，對柑桔皮黃酮資源提取方面的研究報道還不多，純化工藝和化學成分研究鮮見報道。為開發(fā)利用該資源，論文對其提取、分離、純化及化學成分結構鑒定進行了研究。現(xiàn)將主要結果報告如下： 1、建立以蘆丁為標準品的柑桔皮黃酮類含量測定方法，采用 3 種紫外—可見分光光度法對不同條件處理下的柑桔皮中總黃酮含量進行了

3、測定和比較分析。研究表明，3 種分光光度測定方法中，黃酮含量以硝酸鋁顯色法(345 nm)為最高，直接測定法(270 nm)次之，氯化鋁顯色法(415 nm)最低；經(jīng)過HPLC檢測后，選定氯化鋁(275 nm)為顯色系統(tǒng)的含量測定方法。 2、為確定最優(yōu)的提取條件，利用中心組合設計對柑桔皮總黃酮纖維素酶法輔助提取工藝中的浸提時間(X<,2>)、浸提溫度(X<,4>)、pH值(X<,3>)和酶用量(X<,1>)4因子的最優(yōu)化組合進行

4、了定量研究，建立并分析了各因子與黃酮得率(Y)關系的數(shù)學模型：Y=-17.41531250+7.14583333X<,1>+0.11956250X<,2>+2.52125000X<,3>+0.25337500X<,4>-6.36458333X<,1>*X<,1>-0.00064896X<,2>*X<,2>+0.00862500X<,2>*X<,3>-0.32958333X<,3>*X<,3>-0.01275000X<,3>*X<,4>-

5、0.00204583X<,4>*X<,4>。結果表明：最佳的工藝條件為酶用量0.55％、時間123 min、pH值4.4、溫度48℃。經(jīng)試驗驗證，在此條件下，黃酮得率(3.51±0.13)％(n=3)，與理論計算值3.621669％基本一致。回歸模型能較好地預測柑桔皮中總黃酮的提取得率。 3、對柑桔皮中的總黃酮進行微波提取，采用L<,16>(4<'4>)正交優(yōu)化試驗，以探討微波功率、液料比、輻照時間、pH值和提取次數(shù)對柑桔皮黃酮

6、提取率的影響。正交試驗結果表明，微波法提取總黃酮的最佳條件是：微波功率400 W，輻照時間180 s，液料比50，pH值5。在此條件下提取兩次，所得總黃酮含量為3.37％。 4、采用二次通用旋轉組合設計研究了柑桔皮中總黃酮的超聲波輔助提取工藝，并對建立的數(shù)學模型 Y=-10.20174246+0.19594606X<,1>+1.32168206X<,2>+0.19143333X<,3>+0.00024257X<,1>*X<,4>

7、-0.00125581X<,2>*X<,4>-0.00144333X<,1>*X<,1>-0.10808333X<,2>*X<,2>-0.00363833X<,3>*X<,3>-0.00006954X<,4>*X<,4>進行了規(guī)劃求解及試驗驗證。結果表明：pH值(X<,2>)對總黃酮得率(Y)有極顯著影響，乙醇濃度(X<,1>)、液料比(X<,3>)以及時間(X<,4>)同乙醇濃度之間和時間同pH值之間的交互項對總黃酮得率有顯著影響，超

8、聲時間對總黃酮得率無明顯影響。經(jīng)試驗驗證，當pH值為5.6、乙醇濃度為75％、液料比為26、超聲時間為80 min時總黃酮得率最高，達(3.314±0.063)％(n=3)，與理論計算值3.348449％基本一致。回歸模型可較好地預測柑桔皮中總黃酮的提取得率。 5、采用反相高效液相色譜測定了不同提取條件下柑桔皮中橙皮苷和柚皮苷的含量。色譜柱為ODS C<,18>柱(150 mm×4.6 mm i.d.)，流動相為甲醇—水(體積比

9、為40/60)，流速為1.0 mL/min，檢測波長270 nm，柱溫25℃。橙皮苷和柚皮苷的線性范圍分別為0.007168g/L～0.28 g/L和0.012288 g/L～10.48 g/L；二者含量分別為17.5～21.9 mg/g(RSD=2.2～3.1％)和2.14～2.39 mg/g(RSD=2.8～3.7％)；其平均回收率分別為96.5～101.4％(RSD=2.3～3.3％)和97.3～103.6％(RSD=2.8～3.