白骨壤果實中黃酮類化合物的提取、分離純化及抗氧化活性研究.pdf

1、白骨壤(Avicennia marina),是紅樹林的主要先鋒樹種,主要分布于廣東、廣西、福建、海南、臺灣、香港、澳門等地,生長林地面積超過7000 hm2。全國白骨壤果實年產(chǎn)量達2萬噸以上,其中湛江地區(qū)約9000噸/年,資源豐富,但目前尚未合理開發(fā)利用。國內(nèi)外對于白骨壤植物資源的研究主要集中在其樹枝、樹葉、樹根等的活性成分,而果實方面研究尚少；前期研究發(fā)現(xiàn)白骨壤果實中含有較多的黃酬類化合物,亟待開發(fā)。本文以采自湛江的白骨壤果實為原料,

2、研究果實中黃酮化合物的提取、分離、純化工藝,并利用體外實驗檢測其抗氧化活性,以期為白骨壤資源的保護和綜合利用提供理論依據(jù)。
　　 研究的主要內(nèi)容與結(jié)果如下:
　　 1、以黃酮提取率為指標,采用加熱回流法,研究水、95％乙醇、甲醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚等七種不同極性溶劑對白骨壤果實的提取效果,結(jié)果表明水、甲醇和95％乙醇提取液中可溶性成分和總黃酮含量較高。綜合考慮,選取乙醇-水作為提取溶劑。然后通過單因素試驗和響

3、應(yīng)曲面法優(yōu)化了白骨壤果實總黃酮的提取工藝,探討溶劑濃度、料液比、溫度和時間四個因素對提取率的影響,得到乙醇-水浸提工藝的最佳條件為提取溫度55℃、提取時間3.5h、乙醇濃度66％、料液比1:22(m/V),總黃酮提取率可達8.613％,制備的白骨壤果實粗黃酮(AFC)中黃酮的質(zhì)量分數(shù)為17.39％。
　　 2、通過比較10種大孔吸附樹脂對白骨壤果實黃酮的吸附和解吸能力,確定AB-8大孔吸附樹脂為最佳；通過靜態(tài)試驗和動態(tài)試驗,確定

4、了AB-8樹脂分離純化白骨壤果實粗黃酮的最適條件:柱子規(guī)格1.6cm×40cm,填料徑高比1:22.5,柱體積72 mL；吸附質(zhì)溶劑:水,吸附質(zhì)溶劑pH:4.65,洗脫劑:80％乙醇,洗脫劑pH:6.51,上樣濃度:3mg/mL,上樣速度:1.5mL/min,上樣量:7.5個柱體積,洗脫速度:2mL/min,洗脫量:2個柱體積。分離得到的白骨壤果實黃酮精制品(AFP)中黃酮的質(zhì)量分數(shù)為88.67％,純化倍數(shù)為5.1倍。
　　 采

5、用Sephadex LH-20型葡聚糖凝膠將精制的黃酮化合物進一步分離得到F1、F2、F3、F4、F5共五個組分。通過紫外光譜、顏色鑒別反應(yīng)和HPLC進行初步定性分析,結(jié)果表明F1、F2、F3、F4四個組分為黃酮類化合物,F5為C3-OH氫被取代的黃酮醇類化合物,這五個組分并非單一化合物,而是結(jié)構(gòu)類似的一類黃酮化合物。
　　 3、以清除率為指標,研究七種不同溶劑的提取液、粗黃酮、精制品和五個組分對DPPH自由基、羥基自由基及超氧

6、陰離子自由基的抗氧化活性。結(jié)果表明,除石油醚以外的六種溶劑的提取液對DPPH自由基的清除活性均高于對羥基自由基和超氧陰離子自由基的清除活性,極性較弱的溶劑丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚提取液對羥基自由基的清除能力強于對超氧陰離子自由基的清除能力；強極性的水、甲醇及95％乙醇提取物的總抗氧化能力明顯高于其他溶劑的提取物。AFP對三種自由基的清除效果均高于AFC,組分F5對三種自由基的清除能力均最低；AFC、AFP及五個組分對DPPH及超氧