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1、背景與目的:經(jīng)皮腔內(nèi)血管成形術(shù)和支架植入術(shù)是目前治療血管狹窄的有效手段,但術(shù)后3-6個(gè)月30%-50%的再狹窄率是目前臨床急需解決的問(wèn)題。血栓的形成、早期的內(nèi)膜增生及晚期的血管重塑構(gòu)成了血管成形術(shù)后再狹窄的病理過(guò)程。此過(guò)程中,外膜成纖維細(xì)胞被激活,發(fā)生轉(zhuǎn)型、遷移、增殖、分泌膠原而導(dǎo)致的血管限制性重塑被認(rèn)為起著關(guān)鍵的作用。本課題建立兔髂總動(dòng)脈球囊損傷模型,研究已酮可可堿(PTX)對(duì)再狹窄這一病理變化的影響,探討PTX預(yù)防再狹窄的可能機(jī)制。
2、
材料與方法:取健康成年雄性新西蘭白兔75只,隨機(jī)化分得3大組:(1)假手術(shù)組(n=15);(2)單純球囊損傷組(n=30):僅接受球囊過(guò)度擴(kuò)張損傷術(shù);(3)PTX治療組(n=30):PTX治療組自術(shù)前一天起腹腔注射PTX42mg/kg/day直至取材。每大組中再隨機(jī)平分成3個(gè)亞組,1周組、4周組及12周組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)前及取材前,經(jīng)耳緣靜脈采血測(cè)定血漿纖維蛋白原濃度。取材后行形態(tài)學(xué)分析,測(cè)定管腔面積(LA)及總血管面積即外彈力
3、層包繞的面積(EEL),分別作為狹窄程度及收縮性重構(gòu)的指標(biāo);免疫組織化學(xué)high-SABC法檢測(cè)細(xì)胞核增殖抗原(PCNA)、α-肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的表達(dá),觀(guān)察細(xì)胞增殖情況及細(xì)胞的轉(zhuǎn)型;膠原纖維特殊染色(VG染色),測(cè)定平均灰度值,觀(guān)察膠原增生及分布情況。
結(jié)果:(1)血管形態(tài):球囊組與用藥組均可見(jiàn)內(nèi)彈力板斷裂,新生內(nèi)膜增生,LA變小,但術(shù)后4周及12周時(shí),用藥組較球囊組平均分別增加了27%(1.12±0.22mm2 vs.
4、0.88±0.19 mm2 at week4;P<0.05)與58%(0.95±0.27mm2 vs.0.60±0.14mm2 at week12;P<0.01),而EEL則平均分別增加了25%(2.15±0.31mm2 vs.1.72±0.30mm2 at week4;P>0.05)及51%(1.91±0.28mm2 vs.1.27±0.34mm2 at week12;P<0.01),球囊組LA與EEL的相關(guān)系數(shù)為為r4w=0.48及
5、r12w=0.85,兩者比較P<0.05。
(2)細(xì)胞的增殖:術(shù)后1周時(shí),外膜及內(nèi)膜均有大量PCNA陽(yáng)性細(xì)胞,用藥組外膜的增殖指數(shù)平均為0.67±0.05,而球囊組為0.95±0.03,P<0.01,球囊組新生內(nèi)膜的增殖指數(shù)同樣較用藥組顯著增高(0.98±0.02vs.0.76±0.11;P<0.01)。術(shù)后4周時(shí)兩者外膜不見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞,而新生內(nèi)膜細(xì)胞增殖指數(shù)仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,分別為0.04±0.02及0.10±0.04,P<0
6、.05。術(shù)后12周時(shí),兩組血管均幾乎不見(jiàn)PCNA陽(yáng)性細(xì)胞存在。
(3)細(xì)胞的轉(zhuǎn)型:用藥組術(shù)后1周時(shí)外膜α-SMA染色的陽(yáng)性細(xì)胞百分比率較球囊組平均減少約17%,(0.18±0.07 vs.0.35±0.10;P<0.01),而術(shù)后4周及12周時(shí)外膜α-SMA陽(yáng)性細(xì)胞均消失,新生內(nèi)膜則聚集了大量α-SMA陽(yáng)性細(xì)胞,在4周時(shí),用藥組比球囊組平均減少18%,(0.55±0.14vs.0.73±0.15;P<0.01)。
(
7、4)膠原的增生:術(shù)后4周球囊組VG染色可見(jiàn)外膜膠原纖維斷裂,排列紊亂,較用藥組外膜膠原顯著增生,膠原平均灰度值升高(24.36±2.68 vs.21.40±3.46 at week4;P<0.05 and34.06±2.81vs.24.97±2.69 at week12;P<0.01)。用藥組新生內(nèi)膜平均灰度值均分別較同期球囊組低(7.31±3.50 vs.9.86±3.82 at week4;P<0.05 and8.05±2.14 v
8、s.11.79±3.12 at week12;P<0.01)
(5)血漿纖維蛋白原濃度:假手術(shù)組動(dòng)物血漿纖維蛋白原濃度無(wú)明顯變化。行球囊損傷后,動(dòng)物血漿纖維蛋白原濃度升高,以1周時(shí)最高。球囊組術(shù)后1周較術(shù)前平均升高了約0.67±0.19umol/L,P<0.01,PTX組平均升高了0.11±0.02umol/L,P<0.05,球囊組與用藥組之間進(jìn)行比較,P<0.01。球囊組在術(shù)后4周時(shí)血漿纖維蛋白原濃度已明顯下降。用藥組術(shù)后4
9、周及球囊組術(shù)后12周的血漿纖維蛋白原濃度與術(shù)前比較無(wú)差別。
結(jié)論:
1、球囊過(guò)度擴(kuò)張損傷動(dòng)脈血管后,血管外膜成纖維細(xì)胞激活,增殖活性增強(qiáng),并表達(dá)α-SMA轉(zhuǎn)型成肌成纖維細(xì)胞,大量分泌膠原纖維,與血管損傷后晚期狹窄的發(fā)生關(guān)系密切;新生內(nèi)膜細(xì)胞亦產(chǎn)生膠原,但其含量的改變不及外膜顯著。
2、己酮可可堿能通過(guò)抑制外膜成纖維細(xì)胞的增殖、向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)型及分泌膠原而改善血管損傷后的血管限制性重塑,此外,PTX對(duì)新生
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