連續(xù)降溫對(duì)大菱鲆血液生理生化指標(biāo)的影響及分子機(jī)制.pdf

1、目前在海產(chǎn)品運(yùn)輸中應(yīng)用較廣泛的是加冰充氧帶水運(yùn)輸,物流成本高、品質(zhì)損耗大、安全隱患較大。而近年來(lái)興起的無(wú)水保活運(yùn)輸,利用水產(chǎn)動(dòng)物在生態(tài)冰溫區(qū)的休眠特性,可以達(dá)到降低運(yùn)輸成本、保持水產(chǎn)動(dòng)物品質(zhì)的目的,因而應(yīng)用前景廣闊。大菱鲆是我國(guó)北方廣泛養(yǎng)殖的海水品種,研究大菱鲆連續(xù)降溫過(guò)程中的生理生化指標(biāo)的變化及基因表達(dá)機(jī)制,對(duì)改善其?；钸\(yùn)輸?shù)姆椒?延長(zhǎng)保活運(yùn)輸時(shí)間,具有很高的應(yīng)用價(jià)值。鑒于此,本研究探索了連續(xù)降溫對(duì)大菱鲆血清中生理生化指標(biāo)的影響及分子

2、機(jī)制,初步了解了大菱鲆的冷應(yīng)激耐受性機(jī)理并為大菱鲆無(wú)水?；钸\(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)提供理論依據(jù)。
　　1.連續(xù)降溫對(duì)大菱鲆血清生理生化指標(biāo)的影響
　　通過(guò)生化方法檢測(cè)連續(xù)降溫過(guò)程中大菱鲆的血清生化指標(biāo),以初步反映大菱鲆在降溫過(guò)程中的新陳代謝和應(yīng)激反應(yīng)狀況,并從中篩選較為靈敏的血清指示性指標(biāo)。結(jié)果如下:血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶的活性變化說(shuō)明大菱鲆的肝臟和心臟功能受到了一定影響,血清葡萄糖和皮質(zhì)醇含量的顯著升高,說(shuō)明大菱鲆機(jī)體對(duì)降溫產(chǎn)生了應(yīng)

3、激反應(yīng),肌肉乳酸含量的顯著升高說(shuō)明大菱鲆有氧呼吸受到影響,而其余組織在降溫過(guò)程中反應(yīng)較小。
　　2.連續(xù)降溫對(duì)大菱鲆HSP70和HSP90基因表達(dá)的影響
　　通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù),探索連續(xù)降溫過(guò)程與相關(guān)基因表達(dá)量之間的關(guān)系。從分子水平對(duì)機(jī)體降溫過(guò)程中的應(yīng)激變化規(guī)律給予初步解釋。研究了連續(xù)降溫對(duì)大菱鲆不同組織中 HSP70和 HSP90基因表達(dá)量的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn), HSP70的表達(dá)具有組織和溫度特異性。心臟、脾臟、腦和

4、頭腎對(duì)低溫應(yīng)激的自我調(diào)節(jié)能力較強(qiáng),肝臟和腎臟只在降溫過(guò)程初期有一定的應(yīng)激反應(yīng),腸組織HSP70的表達(dá)量變化沒有規(guī)律性,上述幾種組織不能作為指示機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)程度的評(píng)價(jià)指標(biāo)。在鰓和胃中,HSP70的表達(dá)量隨溫度的降低變化靈敏,能反映出溫度降低對(duì)機(jī)體有無(wú)損傷。HSP90對(duì)溫度降低的適應(yīng)能力較HSP70強(qiáng),大部分組織中的HSP90的表達(dá)量都能在1℃時(shí)恢復(fù)到初始水平,而HSP70其在特定的組織例如鰓中隨溫度降低,其表達(dá)量呈不可逆性升高。因此,綜合

5、比較,HSP70更適合作為大菱鲆連續(xù)降溫過(guò)程中應(yīng)激反應(yīng)有無(wú)甚至強(qiáng)弱程度的分子指示劑。
　　3.連續(xù)降溫對(duì)大菱鲆Wap65基因表達(dá)的影響
　　在大菱鲆肝臟組織中克隆得到wap65片段430bp。經(jīng)過(guò)與其它物種進(jìn)行對(duì)比驗(yàn)證后,片段序列已經(jīng)提交到NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)(GenBank登錄號(hào):KF879928)。利用已獲得片段設(shè)計(jì)引物,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)發(fā)現(xiàn),連續(xù)降溫過(guò)程使本實(shí)驗(yàn)中的所有組織在特定溫度下表達(dá)量上調(diào)(腦、胃、肝臟、頭腎、腎、

6、脾臟、肌肉、腸、鰓、心臟)。腦、胃、肝臟、肌肉和腸組織中的 Wap65的表達(dá)量在降溫過(guò)程中變化較小,對(duì)溫度變化的組織穩(wěn)定性較強(qiáng);頭腎、腎臟和脾臟組織Wap65的變化差異顯著,說(shuō)明這三種組織中的Wap65表達(dá)量對(duì)連續(xù)降溫的變化較為靈敏。
　　本研究通過(guò)篩選大量生理生化及分子生物學(xué)指標(biāo),獲得了連續(xù)降溫過(guò)程中能靈敏反映大菱鲆代謝變化的血清生理生化及分子生物學(xué)指標(biāo),肌肉乳酸含量隨著溫度的降低顯著升高,可以作為大菱鲆低溫應(yīng)激的靈敏指標(biāo);血清