活動(dòng)性肺結(jié)核患者外周血中分泌IL-22的淋巴細(xì)胞亞群的探討.pdf

1、研究背景：IL-22是在2000年報(bào)道發(fā)現(xiàn)的一種炎性細(xì)胞因子，可由多種免疫細(xì)胞和組織分泌，對(duì)于炎癥性疾病和自身免疫性疾病的發(fā)生具有重要的調(diào)節(jié)作用。雖然近年發(fā)現(xiàn)的Th17細(xì)胞以分泌IL-17和IL-22等細(xì)胞因子為特征，參與了多種炎癥性疾病和自身免疫病的發(fā)生發(fā)展,但新近又有報(bào)道，以分泌IL-22為主要特征的Th22細(xì)胞在機(jī)體感染病毒或細(xì)菌等病原體后，可以激活其他免疫細(xì)胞，并且?guī)椭鷻C(jī)體控制炎癥對(duì)抗感染。本室近期研究工作發(fā)現(xiàn)，在結(jié)核病（TB）

2、患者外周血中分泌IL-17的γδT細(xì)胞亞群的比例升高，但在抗TB感染免疫中的作用并不十分清楚；另外，在TB患者外周血中是否也存在分泌IL-22的γδ T細(xì)胞，是否也在抗TB感染免疫中發(fā)揮作用以及與γδT17細(xì)胞的關(guān)系等均有待探討。
　　目的：檢測(cè)不同淋巴細(xì)胞亞群中 IL-22產(chǎn)生細(xì)胞的分布，探討 TB患者和健康人（HD）外周血中分泌IL-22和IL-17的αβT細(xì)胞、γδT細(xì)胞、B細(xì)胞及NK細(xì)胞等淋巴細(xì)胞亞群比例的變化，以及結(jié)核桿

3、菌（M.tb）耐熱抗原（Mtb-HAg）體外活化擴(kuò)增的γδT（Mtb-AT）分泌 IL-22的情況，以探討不同淋巴細(xì)胞亞群在抗 M.tb感染免疫應(yīng)答和TB發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：1.采集22例活動(dòng)性肺結(jié)核病人和18例HD外周血，加入佛波醇酯（PMA）和鈣離子霉素（Ionomycin）刺激培養(yǎng)2小時(shí)后，再加入莫能霉素（Monensin）繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，收集細(xì)胞，加入熒光標(biāo)記單抗體進(jìn)行表面分子和胞內(nèi)染色，流式細(xì)胞儀檢測(cè)分泌IL-

4、22和分泌IL-17的淋巴細(xì)胞亞群的比例。2.采用密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），加入Mtb-HAg和rIL-2刺激培養(yǎng)7-10天后，使其成為富含效應(yīng)性γδ T細(xì)胞的Mtb-Hag激活的T細(xì)胞（MTb-AT），收集細(xì)胞用PMA/Ionomycin和Monensin以及Mtb-HAg和Monensin刺激培養(yǎng)6小時(shí)，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)分泌IL-22的γδT細(xì)胞亞群的比例。3.采用同一個(gè)體的全血和PBMC同時(shí)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)

5、胞因子法檢測(cè)兩種標(biāo)本中分泌 IL-22的細(xì)胞比例。4.采用同一個(gè)體的全血和PBMC同時(shí)用PMA/Ionomycin刺激培養(yǎng)6小時(shí)，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清用ELISA檢測(cè)IL-22和IL17的含量；采用ELISA檢測(cè)TB和HD外周血漿中IL-22和IL-17的含量。5.從HD和TB外周血分離獲取PBMC后，用RT-PCR的方法檢測(cè)IL-22 mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：1. IL-22分泌細(xì)胞僅占人外周血淋巴細(xì)胞的一小部分，TB病人和HD

6、分別為3.16％和2.69%；且主要由CD3+T細(xì)胞產(chǎn)生，在TB(n=22)病人和HD(n=18)分別為54.56%和64.10%。
　　2.分泌IL-22的淋巴細(xì)胞中，γδT細(xì)胞所占的比例在TB病人（6.45%，n=22）明顯的高于 HD（2.73%，n=18，P﹤0.05)；其它各淋巴細(xì)胞亞群所占比例在 TB病人和HD之間未見差別。
　　3.在CD3 T細(xì)胞、CD4 T細(xì)胞、CD8 T細(xì)胞、γδT細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞中

7、分泌IL-22的細(xì)胞比例，在TB患者(n=22)分別為1.24%、1.58%、0.66%、7.37%、4.13%和0.54%；在HD(n=18)分別為1.83%、2.12%、0.67%、1.81%、1.96%和1.09%，分泌IL-22的γδT細(xì)胞在TB患者明顯高于HD（P﹤0.05）。
　　4.在各T細(xì)胞亞群中，均可以檢測(cè)到共表達(dá)IL-22和IL-17的陽性細(xì)胞；在TB患者中，IL-22+IL-17-細(xì)胞百分比為1.87%，Th

8、17細(xì)胞為3.78%；在 HD中， IL-22+IL-17-細(xì)胞的百分比為2.10%，Th17細(xì)胞為3.65%；Th22細(xì)胞和 Th17細(xì)胞在HD(n=8)和TB(n=15)兩者之間沒有差別。
　　5.分泌IL-22的γδT細(xì)胞在Mtb-HAg活化擴(kuò)增的γδT細(xì)胞（Mtb-AT）中的比例在TB患者（0.75%，n=3）與HD（1.41%，n=5）之間比較沒有差別。
　　6.無論TB患者還是HD，用Mtb-HAg再刺激的Mtb

9、-AT中分泌IL-22的γδT細(xì)胞的比例與單加Monensin未刺激組相比均沒有差別（對(duì)TB，0.19%VS0.40%， n=3；對(duì)HD，1.16%VS0.62%，n=5，p>0.05）。
　　7.在全血標(biāo)本中檢測(cè)到的分泌IL-22的各T細(xì)胞亞群的比例均明顯高于在PBMC中的檢出比例；全血中分泌IL-22的NK細(xì)胞和B細(xì)胞比例則明顯低于在PBMC中的檢出比例。
　　8. ELISA法檢測(cè)的IL-22和IL-17在全血培養(yǎng)上清

10、中的濃度均明顯高于在PBMC培養(yǎng)上清中的濃度；TB患者外周血漿IL-22和IL-17的濃度均明顯高于HD。
　　9. TB患者外周血IL-22的mRNA表達(dá)明顯高于HD。
　　結(jié)論：
　　1.人類外周血淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞是分泌IL-22的最主要來源，其中CD4+T細(xì)胞又是分泌IL-22的主要來源之一。
　　2. TB患者外周血中分泌IL-22的γδT細(xì)胞增多，并且分泌IL-22的γδT細(xì)胞比例增高并非與分泌IL-1

11、7的γδT細(xì)胞比例增高引起有關(guān)。
　　3. TB患者外周血中Th17和Th22細(xì)胞比例與HD相比沒有顯著性差異。
　　4. Mtb-HAg可特異性誘導(dǎo)γδT細(xì)胞分泌IFN-γ，而不能誘導(dǎo)分泌IL-22。
　　5.在全血標(biāo)本中檢測(cè)到的分泌 IL-22的T細(xì)胞亞群的比例均明顯的高于其在PBMC中的檢出比例，在全血標(biāo)本中檢測(cè)到的分泌IL-22的NK細(xì)胞和B細(xì)胞比例則明顯低于在PBMC中的檢出比例。
　　6. TB患者外