梅毒血清固定患者外周血Th22細(xì)胞及IL-22的表達(dá).pdf

1、目的:梅毒（syphilis）一種常見的、慢性的、經(jīng)典的性傳播疾病,并能對(duì)全身組織都能造成不可逆的損傷，是我國目前發(fā)病率最高的性傳播疾病之一。近些年來，我國梅毒的發(fā)病率呈現(xiàn)逐步上升的勢態(tài)，對(duì)于梅毒的診治受到關(guān)注。通常梅毒患者在經(jīng)過正規(guī)的驅(qū)梅治療后，患者臨床癥狀消失，梅毒血清學(xué)試驗(yàn)中非梅毒螺旋體血清實(shí)驗(yàn)（如RPR、USR等）可在3-6個(gè)月內(nèi)轉(zhuǎn)為陰性。而在臨床中我們發(fā)現(xiàn)有部分患者在經(jīng)過正規(guī)驅(qū)梅治療后雖然臨床癥狀消失，但是在隨訪過程中非梅毒螺

2、旋體血清學(xué)試驗(yàn)在很長時(shí)間內(nèi)仍然為陽性，未能轉(zhuǎn)陰，即表現(xiàn)為血清固定(Serofast)。這種現(xiàn)象已成為在臨床驅(qū)梅治療中面臨挑戰(zhàn)之一，也同時(shí)會(huì)對(duì)患者心理產(chǎn)生巨大負(fù)擔(dān)。梅毒血清固定的機(jī)制目前尚未完全清楚，梅毒血清固定的發(fā)生目前多認(rèn)為與細(xì)胞免疫存在聯(lián)系，而Th22細(xì)胞及其主要的效應(yīng)分子IL-22已被證明在識(shí)別和攻擊入侵機(jī)體的病毒和病原體或針對(duì)炎癥反應(yīng)做好自我保護(hù)方面起著特殊的作用。關(guān)于Th22及IL-22在梅毒血清固定發(fā)生機(jī)制中的研究國內(nèi)外未見

3、報(bào)道。本課題通過對(duì)梅毒血清固定患者及梅毒血清轉(zhuǎn)陰患者的外周血中Th22細(xì)胞及血清IL-22水平的表達(dá)的分析，為梅毒血清固定發(fā)生機(jī)制的研究提供一個(gè)新的視角，也將能為更好處理梅毒血清固定現(xiàn)象提供新的思路。
　　方法：收集2013年12月-2014年12月期間就診于華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院皮膚科門診的患者，30例確診為梅毒血清固定患者為病例組及30例經(jīng)正規(guī)治療后非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)轉(zhuǎn)陰的患者為對(duì)照組，分別進(jìn)行靜脈采血，我院在

4、梅毒治療后對(duì)非梅毒螺旋體血清學(xué)檢查指標(biāo)為RPR,轉(zhuǎn)陰與否也是用此指標(biāo)來衡量。入組標(biāo)準(zhǔn)：1.梅毒血清固定確診患者；2.就診時(shí)HIV抗體試驗(yàn)陰性；3.已經(jīng)過正規(guī)的驅(qū)梅治療；4.隨訪期間未發(fā)生不潔性行為；5.隨訪期間未出現(xiàn)再感染或復(fù)發(fā)；6.隨訪期間無梅毒臨床表現(xiàn)；7.RPR持續(xù)陽性早期梅毒6個(gè)月，晚期梅毒12個(gè)月以上；8.腦脊液VDRL、FAT-Ab、TPPA均為陰性。排除標(biāo)準(zhǔn)：1.隨訪期間出現(xiàn)梅毒臨床表現(xiàn)；2.近兩月內(nèi)使用糖皮質(zhì)激素及免疫抑

5、制劑；3.伴有可致生物學(xué)假陽性的急性或慢性疾病；4.腦脊液檢查異常；5.有內(nèi)臟梅毒感染。病例組30例，其中男性13例，女性17例，年齡在18-60歲，平均年齡35.3±12.22歲，對(duì)照組30例，其中男性18例，女性12例，年齡在20-58歲，平均年齡30±8.74為歲。經(jīng)t檢驗(yàn)，對(duì)照組的年齡、性別與病例組之間無明顯差異。外周血中Th22細(xì)胞的檢測方法：采集病例組及對(duì)照組患者的肘靜脈血各4ml放入肝素鈉抗凝管中，分離得到外周血單個(gè)核細(xì)胞

6、（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC），然后再向其中先后加入莫能霉素（Monenosinsolution）、佛波醇-12-肉寇酯-13-乙醇（Phorbol-12-myristate-13-acetate PMA）、離子霉素（Ionomycin）置于37℃，5％二氧化碳孵育箱中刺激培養(yǎng)5小時(shí)，然后進(jìn)行細(xì)胞表面染色、固定、透化破膜及胞內(nèi)細(xì)胞因子染色，最后通過流式細(xì)胞儀測定Th22細(xì)胞所占淋巴細(xì)胞的

7、百分比。血清中IL-22的檢測方法：采集病例組及對(duì)照組患者的肘靜脈血各3ml放入EDTA抗凝管中，離心后將收集血清標(biāo)本置于-80℃的冰箱中保存。采用雙抗體夾心ELISA法檢測所收集到的血清標(biāo)本中IL-22的表達(dá)水平。最后應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)病例組及對(duì)照組的兩種數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，分析外周血中Th22細(xì)胞及血清中的IL-22的表達(dá)水平在病例組及對(duì)照組之間是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。檢驗(yàn)水準(zhǔn)取P<0.05有意義。
　　結(jié)果：

8、
　　1、流式細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果(%):外周血中Th22細(xì)胞表達(dá)比例在病例組(3.56±0.22)與對(duì)照組(3.40±0.20)之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.712 P=0.104P＞0.05)；
　　2、雙抗體夾心ELISA方法檢測結(jié)果(pg/ml):血清中IL-22的表達(dá)在病例組(11.77±1.88)與對(duì)照組(14.41±1.28)之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-3.659 P=0.002 P＜0.01)。
　　結(jié)論:

9、　　1、外周血中Th22細(xì)胞表達(dá)可能與梅毒血清固定的發(fā)生無直接相關(guān)性；或者說發(fā)生梅毒血清固定的患者外周血中Th22細(xì)胞可能為活化的效應(yīng)性T細(xì)胞，能向外分泌各種效應(yīng)性細(xì)胞因子而在疾病的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮作用，而對(duì)照組外周血中存在是無功能性的Th22細(xì)胞，既未被激活的Th22細(xì)胞。故Th22細(xì)胞在外周血百分比在血清固定患者組與非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)轉(zhuǎn)陰患者組之間無差異；
　　2、梅毒血清固定患者病例組血清中IL-22的表達(dá)量低于非梅毒螺