外源性SOCS-3對異位子宮內膜間質細胞凋亡和增殖的影響研究.pdf

1、背景:
　　子宮內膜異位癥（內異癥）是一種常見的婦產科疾病，在育齡女性中的發(fā)病率可達8％-10％，臨床上常表現(xiàn)為痛經(jīng)、慢性盆腔痛、性交不適、不孕等癥狀，嚴重影響女性的生活質量。內異癥雖然是一種良性疾病，但卻具有惡性腫瘤的特點，如增殖、復發(fā)、轉移等。對于該病的發(fā)病有多種學說進行解釋，例如體腔上皮化生學說、淋巴血管轉移學說、干細胞學說、在位內膜決定論等等，其具體發(fā)病機制目前尚無定論，最廣為接受的仍然是Sampson的經(jīng)血逆流學說。但是

2、異位子宮內膜細胞要在子宮腔及子宮肌層以外的部位生長增殖并形成內異病灶，則需要抵抗對機體內環(huán)境穩(wěn)態(tài)具有維護作用的細胞凋亡的發(fā)生。我們可以試圖對參與細胞增殖及凋亡的相關信號通路進行探索，從而為研究內異癥的發(fā)病機制和治療方案提供新的思路。
　　Janus激酶/信號轉導與轉錄活化因子（Janus kinase/signal transducer andactivator of transcription，JAK/STAT）是目前研究較多的

3、一條信號通路，該通路廣泛參與細胞的增殖、凋亡、轉移、血管生成等過程。而細胞因子信號抑制因子(Suppressor of cytokine signaling，SOCS)是JAK/STAT信號通路的主要負反饋調節(jié)因子，其表達及活性對調節(jié)該通路發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤細胞中均存在STAT-3的活性形式p-STAT-3的異常高表達及SOCS-3表達量的下調，且運用JAK-2特異性抑制劑AG490或外源性導入SOCS-3后可通過抑制p-

4、STAT-3，導致腫瘤細胞增殖受阻，同時可促進細胞凋亡，最終達到抑制腫瘤細胞生長的作用。而內異癥雖為良性疾病，但在許多生物學行為上具有與惡性腫瘤相似的特點，如過度增殖、凋亡抑制、轉移、復發(fā)等。我們的前期研究也發(fā)現(xiàn)，異位子宮內膜組織與在位及正常子宮內膜組織相比較，存在p-STAT-3的高表達及SOCS-3的下調，進而我們推測異位子宮內膜中p-STAT-3和SOCS-3的異常表達及相互作用可能參與了子宮內膜異位癥的發(fā)生發(fā)展過程。因此本研究利

5、用慢病毒載體向異位子宮內膜間質細胞(Ectopic endometrial stromal cells，EESCs)導入外源性SOCS-3，觀察SOCS-3上調后對EESCs中JAK/STAT-3信號通路的影響及其對細胞增殖和凋亡的調控。
　　方法:
　　選取12例卵巢型內異癥患者的異位子宮內膜囊壁進行細胞原代培養(yǎng)，獲取EESCs，波形蛋白染色對EESCs進行純度鑒定;利用重組構建的SOCS-3和GFP融合表達的慢病毒載體（

6、LV-SOCS3-GFP）感染實驗組EESCs，使其過表達SOCS-3，同時利用僅攜帶綠色熒光蛋白(GFP)基因序列的慢病毒載體(LV-GFP)感染同源EESCs，設為陰性對照組，熒光顯微鏡下觀察細胞經(jīng)慢病毒感染后GFP的表達，評估感染效率;Real-Time PCR檢測各組細胞中SOCS-3、 JAK-2、STAT-3 mRNA表達水平;Western Blot檢測SOCS-3、JAK-2、STAT-3蛋白表達情況，以及JAK-2、S

7、TAT-3蛋白的磷酸化水平(p-JAK-2、p-STAT-3);流式細胞儀檢測SOCS-3過表達后對EESCs凋亡及周期的影響。
　　結果:
　　慢病毒載體感染EESCs72h后，感染效率可達90％以上;實驗組SOCS-3mRNA水平明顯上調，與陰性對照組比較具有顯著差異(P＜0.001)，JAK-2、STAT-3 mRNA表達與陰性對照組無顯著差異;實驗組SOCS-3蛋白表達明顯上升，同時出現(xiàn)p-STAT-3蛋白表達的下調