SAA對子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞VEGF表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的:排卵障礙型子宮異常出血（ Ovulatory disorders uterine bleeding，AUB-O）是一種常見婦科疾病，由下丘腦-垂體-卵巢軸神經(jīng)內(nèi)分泌失調(diào)所致的子宮異常出血，是在激素誘發(fā)下，子宮局部微環(huán)境因素發(fā)生改變的結(jié)果。目前對于排卵障礙型子宮異常出血的病理機(jī)制尚未完全清楚。我們前期研究運(yùn)用 SELDI差異蛋白組篩選技術(shù)，發(fā)現(xiàn)排卵障礙型子宮異常出血患者血清淀粉樣蛋白 A（Serum Amyloid A, SAA）水

2、平升高了十余倍，且呈持續(xù)高水平狀態(tài)，而血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF)在排卵障礙型子宮異常出血病人血清中顯著下降，但其病理生理學(xué)意義未明，推測高濃度SAA與VEGF相關(guān)，進(jìn)而可引起子宮內(nèi)膜修復(fù)中血管生成障礙，從而參與排卵障礙型子宮異常出血的發(fā)生與發(fā)展。本研究從體外在細(xì)胞水平研究 SAA對人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞 VEGF表達(dá)的影響，探討其在排卵障礙型子宮異常出血發(fā)病機(jī)制中的作

3、用，為排卵障礙型子宮異常出血的診治提供一個新的靶點(diǎn)和新的血清監(jiān)測標(biāo)志物。
　　方法:首先在體外分離和培養(yǎng)人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞。培養(yǎng)成功后分組，隨機(jī)分為0 mg/L、5mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L， SAA作用組(24h)以及20mg/LSAA作用0、6、12、36、72h組,每組設(shè)3個孔,即重復(fù)3次，通過實(shí)時熒光定量(RT-PCR)、qRT-PCR測定各組細(xì)胞 VEGF mRNA轉(zhuǎn)錄水平; Western

4、 blot方法檢測 hESCs細(xì)胞 VEGF蛋白的表達(dá)以及 ELISA法定量檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中VEGF蛋白的分泌。并用SPSS18.0軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析及作圖。
　　結(jié)果:在體外成功分離和培養(yǎng)了原代子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞。低濃度血清淀粉樣蛋白 A（ SAA，10mg/L）能升高子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞（hESCs）VEGFmRNA、蛋白及分泌水平，但隨著SAA濃度（20mg/L）的升高，與對照組比較，VEGFmRNA水平、蛋白水平、分泌水