抗生素處理對桉樹和番茄內生菌群落及內生菌防治青枯病效果的影響.pdf

1、桉樹青枯病是由茄拉爾氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的一種系統(tǒng)性維管束病害，也是一種具有毀滅性的土傳病害，給桉樹產業(yè)帶來了極大的損失。本研究通過抗生素對尾葉桉和番茄內生細菌種群的影響探索桉樹抗病性與內生細菌種群的關系，同時通過抗生素處理尾葉桉后接種拮抗細菌，探索其內生細菌種群變化對拮抗菌應用于桉樹青枯病防治的影響，為篩選和利用生防菌尋找更廣泛的途徑。
　　1、桉樹青枯病拮抗細菌的篩選和定殖力的測定
　

2、　利用枯草芽孢桿菌Y4和小麥無菌實生苗的內生細菌(編號分別為CN181、G1、G2、G3、G4、G5、G6、 G7和G8)，采用平板對峙法和水培系統(tǒng)浸根法篩選對桉樹青枯病菌具有拮抗作用的菌株。結果表明:平板對峙法篩選試驗中G1、G4、G6、G8、CN181和Y4在KB培養(yǎng)基上均可形成寬而透明的抑菌帶，其中菌株G6、CN181和Y4的抑菌效果最好，抑菌帶寬度均在30mm以上，對青枯病菌具有較好的拮抗作用。水培系統(tǒng)浸根法進一步測定其對桉樹青

3、枯病的作用，結果顯示它們對桉樹青枯病均具有一定的防治效果，但Y4菌株處理后具有延遲青枯病發(fā)病時間的作用，且發(fā)病率均低于其他菌株，僅為26.7％;綜合以上兩種方法確定Y4菌株對青枯病菌抑制效果較好。
　　采用水培系統(tǒng)浸根法測定了Y4菌株在尾葉桉苗內的定殖情況，結果表明，在Y4菌懸液處理1d后即可在尾葉桉內檢測到該細菌，并且定殖量達到了3.17×105CFU·g-1，之后其定殖量逐漸減少，在第20d時依然可以檢測到7.84×104CF

4、U·g-1。表明Y4在尾葉桉苗內前期定殖量大且迅速，在一定時間內可以有效地定殖于尾葉桉內，但在后期定殖力減弱。
　　2、抗生素處理對Y4菌株在尾葉桉內的定殖和室內生防效果的影響
　　利用抗生素處理尾葉桉實生苗后，研究其對Y4菌株在尾葉桉內的定殖和室內生防效果的影響。結果表明:在利福平、四環(huán)素、鏈霉素和氯霉素濃度分別為70、60、50和30mg·L-1時對尾葉桉苗不會造成傷害。室內對Y4拮抗菌防治桉樹青枯病的測定結果表明，抗生

5、素處理后接種Y4菌株可以提高尾葉桉對桉樹青枯病的抗性，但各抗生素的作用表現(xiàn)不同，發(fā)病率最低的為利福平和四環(huán)素處理的尾葉桉?？股靥幚砦踩~桉后接種Y4菌株，第6d時在尾葉桉內分離到的Y4菌落數(shù)量最多，且以利福平處理的最多。同時在土壤系統(tǒng)中Y4菌株定殖量變化的穩(wěn)定性較水培系統(tǒng)浸根處理的好，但隨著處理時間的延長，Y4菌株定殖量均逐漸較少。測定Y4菌株在尾葉桉不同部位的定殖時，發(fā)現(xiàn)在尾葉桉各部位中Y4菌落數(shù)量的分布規(guī)律呈遞增趨勢，即:葉＜莖＜根

6、。隨著處理時間的變化不同抗生素處理尾葉桉后對Y4菌株在其各部位定殖的影響不同，利福平和氯霉素處理均有利于Y4菌株在根、莖、葉各部位的定殖。鏈霉素和四環(huán)素處理尾葉桉第9d時，對Y4菌株在莖和葉部表現(xiàn)促進作用，根部作用不明顯，其他處理時間對其定殖均表現(xiàn)抑制作用。
　　3.抗生素對番茄和尾葉桉內生細菌種群結構變化與其抗病性的關系
　　以番茄和尾葉桉實生苗為試驗材料，測定了3個濃度的利福平(20、40和60mg·L-1)對番茄植株內

7、生細菌種類、群落數(shù)量和青枯病抗性的影響，以及不同種類的抗生素對尾葉桉的內生細菌群落的影響。結果表明，4～5葉期番茄植株在利福平溶液濃度不超過60mg·L-1時生長良好。各濃度利福平在不同處理時間內對番茄植株內生細菌群落產生了刺激或抑制作用，使番茄植株各部位內生細菌的種類和數(shù)量出現(xiàn)了多樣性的變化。這些變化使番茄植株提高了其對青枯病菌的抗性，尤其是利福平40mg·L-1處理組在第15d時，接種青枯病菌的番茄植株發(fā)病率只有45.8％。

8、　　在尾葉桉正常生長不受影響的情況下，各抗生素中利福平、四環(huán)素的最終處理濃度分別為70和80mg·L-1，鏈霉素和氯霉素為50mg·L-1。經(jīng)不同抗生素處理后，在不同的處理時間節(jié)點上尾葉桉苗內生細菌群落受到不同程度的影響，其內生細菌的種類和數(shù)量出現(xiàn)了多樣性的變化。在測定抗生素處理后尾葉桉抗病性時，發(fā)現(xiàn)尾葉桉在抗生素處理前期的發(fā)病率較后期的低，且在尾葉桉根、莖和葉部分離到的內生細菌群落多樣性也較豐富，并以氯霉素處理后尾葉桉內分離到的內生細